一、GUS報告基因的定性檢測
GUS能與顯色底物X-gluc 反應，顯現藍色，因而可以通過組織化學染色定性研究GUS的表達水平和表達模式。GUS 染色的穩定性好，組織定位精確，成為在植物中運用很廣的報道基因。
1. GUS染色底物的配制
| 試劑名稱 | 母液濃度 | 母液配制方法 | 工作液濃度 | 工作液配制方法 |
| 磷酸緩沖液（pH7.2） | 0.5 M | 將0.5 M Na2HPO4 和0.5 M NaH2PO4 混合 | 50 mM | 1 ml |
| Triton X-100 | 10% | 取10 ml Triton X-100溶于水，定容至100 ml | 0.1% | 0.1 ml |
| 鐵氰化鉀K3Fe(CN)6 | 100 mM | 將3.2924 g 鐵氰化鉀溶于水，定容至100 ml | 2 mM | 0.2 ml |
| 亞鐵氰化鉀 K4[Fe(CN)6] ?3 H2O | 100 mM | 將4.2239 g 亞鐵氰化鉀溶于水，定容至100 ml | 2 mM | 0.2 ml |
| EDTA | 0.5 M | 將18.61 g Na2EDTA?2H20溶于水，調pH為8.0，定容至100 ml水 | 10 mM | 0.2 ml |
| X-Gluc | / | / | 2 mM | 10.4 mg |
| ddH2O | / | / | / | 定容至10 ml |
表1. GUS染色底物的配制
* 0.5 M Na2HPO4配制方法：將17.907 g Na2HPO4溶于水，定容至100 ml。
0.5 M NaH2PO4的配制方法：將7.800 g NaH2PO4溶于水，定容至100 ml。
2. 染色步驟
（1）染色：加入適量配制好的GUS 染液于24孔板的孔中，將待測樣品浸到GUS染液中，將24孔板置于37℃保溫箱中放置6 h。
（2）漂洗：先后用50%，70%，100%的乙醇漂洗樣品，每次浸泡5分鐘。
（3）脫色：加入100%乙醇浸泡直至完全脫色。
（4）記錄：在體視顯微鏡下拍照記錄。
二、GUS報導基因的定量檢測
GUS 能與底物MUG（分子量352.3，4-甲基傘型酮-β-葡萄糖醛酸苷，4-methylumbelliferylβ-D-glucuronide）反應產生熒光物質MU（分子量198.2，4-甲基傘型酮，4-methylumbelliferone）。MU的激發波長為365 nm，發射波長為456 nm，其含量可由熒光分光光度計測出。因此，我們可以根據單位質量的植物總蛋白在單位時間內產生的熒光物質的多少來定量的檢測GUS含量。
1.試劑配制
（1）1 mol/L Na2HPO4溶液：35.814 g Na2HPO4溶于100 ml水。
（2）1 mol/L NaH2PO4 溶液：15.601 g NaH2PO4 溶于100 ml水。
（3）0.1 M 磷酸緩沖液(pH7.0)：1 mol/L Na2HPO4取5.77 ml，1 mol/L NaH2PO4取4.23 ml，定容至100 ml。
（4）10%SDS溶液：將90 ml 水稍微加熱，加10 g SDS，攪拌溶解，加入幾滴濃鹽酸調節pH至7.2，然后加水定容至100 ml。
（5）0.5 M EDTA (pH8.0)：在80 ml 水中加入18.61 g Na2EDTA?2H2O，用NaOH調pH至8.0（約需2 g 左右的固體NaOH），溶解后定容至100 ml。
（6）GUS酶提取液：0.1 M 磷酸緩沖液（pH7.0）取50 ml；10% SDS取1 ml； 0.5 M EDTA(pH8.0)取2 ml；Triton X-100取100 ul；β-巰基乙醇100 ul；用水定容至100 ml。
（7）MUG底物：稱8.8 mg MUG，溶于10 ml GUS酶提取液中，配制成2 mmol/L 的工作濃度。
（8）反應終止液（0.2 mol/L Na2CO3 ）：稱2.12 g Na2CO3 ，用水定容到100 ml。
（9）考馬斯亮藍G250溶液：考馬斯亮藍G250 10mg，95%乙醇5 ml，H3PO4 10 ml，定容至l00 ml，過濾后4℃保存。
（10）1 mg/ml BSA：20 mg BSA，用GUS提取緩沖液定容至20 ml。
2.植物總蛋白的提取
（1）取新鮮的植物組織100 mg 左右，用液氮將生物材料急速冷凍，然后采用液氮研磨的方式在研缽里磨碎組織。如果不立即研磨，可以先將液氮冷凍處理的植物組織儲存于-80℃冰箱。
（2）將研磨破碎的組織轉到EP管里，并立即加入1 ml 的GUS提取緩沖液，充分混勻。
（3）12 000 rpm，4℃離心5 min，將上清轉至另一潔凈的EP管，冰上放置待用。
3.蛋白濃度的測定（Bradford法）
（1）取7個EP管，分別加入0 μl、2 μl、4 μl、8 μl、12 μl、16 μl、20 μl 的BSA標準液，用水補至相同體積20 μl。加入980 μl 的考馬斯亮藍G250溶液，充分混勻，冰上靜置5 min。用紫外分光光度計測定595 nm 處的吸收值。以蛋白濃度（mg/ml）對吸收值A595做標準曲線。
（2）取待測蛋白樣品10 μl，加10 μl 水，加入980 μl 的考馬斯亮藍G250溶液，充分混勻，冰上靜置5 min。用紫外分光光度計測定595 nm處的吸收值。代入公式，求出蛋白樣品的濃度。
4. GUS表達水平的定量測定
（1）取100 μl 蛋白上清，加入400 μl 37℃預熱的GUS提取緩沖液里，再加入500 μl MUG底物，37℃溫浴。在0 min、15 min、30 min、45 min 和60 min 分別取混合反應物200 ul 加入到800 ul 反應終止液，室溫避光保存。
（2）用熒光分光光度計在激發波長365 nm、發射波長455 nm下，狹縫10 nm 時測定不同時間點的熒光強度值。
（3）以熒光強度值對反應時間作曲線，求出單位時間的熒光強度變化。
（4）用單位時間的熒光強度變化除以參加反應的蛋白量，求出單位質量的蛋白單位時間的熒光強度變化。
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