HIV的檢測與分析——外周血中HIV的分離和定量檢測

實驗步驟	外周血中 H IV 的分離和定量檢測基本方案 1 外周血中 H IV 的培養以及通過 TCID 定量來測定其滴度注：所有的培養都在 37°C ，含 5 % 0 3 2 的加濕培養箱中進行。材料（帶 V 項目見附錄 1) 來自正常個體（H I V -血清反應陰性）及感染個體（H I V -血清反應陽性）的全血無菌 P B S ， p H 7.2，或 H B S S Ficoll-Hypaque 溶液含 2 ug/p l 植物血凝素（P H A ) 或 5 % (V A 0 人 IL- 2 的 R P M I -I O 完全培養基肝素鈉真空試管（附錄 3 G ) Sorvall R T -6000 離心機及 H -1000B 轉子（或與其相當的離心機和轉子），并配備可以離心培養板的托架 50m l 聚丙烯離心管，無菌 2 4 孔微量滴定板，無菌（Falcon) 1 . 將 H I V -血清反應陰性供者的全血收集到含有肝素鈉（濃度< 2 0 U /ml) 的無菌真空試管中。血樣在室溫保存并且在 4 h 內進行處理。每毫升全血的 P B M C 預期得率為 I X l O⁶ ? 2 X 10⁶ 個細胞基本方案 2 感染同種異型 T 淋巴母細胞：原代分離 PBMC 中的 HIV 材料展開

實驗步驟

外周血中 H IV 的分離和定量檢測

基本方案 1 外周血中 H IV 的培養以及通過 TCID 定量來測定其滴度

注：所有的培養都在 37°C ，含 5 % 0 3 2 的加濕培養箱中進行。

來自正常個體（H I V -血清反應陰性）及感染個體（H I V -血清反應陽性）的全血

無菌 P B S ， p H 7.2，或 H B S S

Ficoll-Hypaque 溶液

含 2 ug/p l 植物血凝素（P H A ) 或 5 % (V A 0 人 IL- 2 的 R P M I -I O 完全培養基

肝素鈉真空試管（附錄 3 G )

Sorvall R T -6000 離心機及 H -1000B 轉子（或與其相當的離心機和轉子），并配備可以離心培養板的托架

50m l 聚丙烯離心管，無菌

2 4 孔微量滴定板，無菌（Falcon)

1 . 將 H I V -血清反應陰性供者的全血收集到含有肝素鈉（濃度< 2 0 U /ml) 的無菌真空
試管中。血樣在室溫保存并且在 4 h 內進行處理。每毫升全血的 P B M C 預期得率為 I X l O⁶ ? 2 X 10⁶ 個細胞

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