HPLC基礎知識

鑒于HPLC應用在藥品分析中越來越多，因此每一個藥品分析人員應該掌握并應用HPLC。

（一）概論

一、液相色譜理論發展簡況

色譜法的分離原理是：溶于流動相（mobile phase）中的各組分經過固定相時，由于與固定相（stationary phase）發生作用（吸附、分配、離子吸引、排阻、親和）的大小、強弱不同，在固定相中滯留時間不同，從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。

色譜法最早是由俄國植物學家茨維特（Tswett）在1906年研究用碳酸鈣分離植物色素時發現的，色譜法（Chromatography）因之得名。后來在此基礎上發展出紙色譜法、薄層色譜法、氣相色譜法、液相色譜法。

液相色譜法開始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動相，稱為經典液相色譜法，此方法柱效低、時間長（常有幾個小時）。高效液相色譜法（High performance Liquid Chromatography，HPLC）是在經典液相色譜法的基礎上，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發展起來的。

它與經典液相色譜法的區別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會引起高阻力，需用高壓輸送流動相，故又稱高壓液相色譜法（High Pressure Liquid Chromatography，HPLC）。又因分析速度快而稱為高速液相色譜法（High Speed Liquid Chromatography，HSLP）。也稱現代液相色譜。

二、HPLC的特點和優點

HPLC有以下特點：

高壓——壓力可達150～300Kg/cm 2 。色譜柱每米降壓為75Kg/cm 2 以上。

　　高速——流速為0.1～10.0 ml/min。

　　高效——可達5000塔板每米。在一根柱中同時分離成份可達100種。

　　高靈敏度——紫外檢測器靈敏度可達0.01ng。同時消耗樣品少。

HPLC與經典液相色譜相比有以下優點：

速度快——通常分析一個樣品在15～30min，有些樣品甚至在5min內即可完成。

　　分辨率高——可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果。

　　靈敏度高——紫外檢測器可達0.01ng，熒光和電化學檢測器可達0.1pg。

　　柱子可反復使用——用一根色譜柱可分離不同的化合物。

　　樣品量少，容易回收——樣品經過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。