HPLC由溶劑輸送系統（脫氣機、高壓泵等）、進樣系統（定量泵、六通閥、定量環、進樣針等）、分離系統（色譜柱等）、檢測系統（檢測器等）、記錄及數據處理系統。
高壓輸液泵：將流動相在高壓下連續不斷地送入液路系統，具有有足夠的壓力，輸出流量恒定、可調，輸出壓力平穩，泵室體積小，泵體抗腐蝕、耐酸等特點。
壓力平穩、流速恒定是HPLC系統穩定、重現性良好的前提條件，多數的HPLC故障、色譜數據異常均會表現出壓力異常，如偏高、偏低、波動大等，在日常使用中需要特別關注壓力變化。
在線脫氣機：四元低壓系統屬于泵前混合，由于在常壓下混合，極易產生氣泡，必須配有在線脫氣機，并要求流動相使用前進行脫氣，流動相脫氣得目的如下：
使色譜泵輸液均勻準確，減小脈動。
提高保留時間和色譜峰面積的重現性。
防止氣泡引起尖峰。
使基線穩定，提高信噪比。
降低溶劑的紫外吸收本底。
減少死體積。
防止填料氧化。
進樣系統：分為手動進樣系統和自動進樣系統， 主要由定量環、六通閥、進樣針等部件組成。手動進樣系統的定量環用于準確定量，分為5μl、10μl、20μl等，需要根據不同進樣量選擇合適的定量環；自動進樣系統儀器自帶定量環多為100μl，如進樣量大于定量環體積需咨詢相應儀器工程師更換定量環及計量泵等，六通閥是最理想的進樣部件，由圓形密封墊（轉子）和固定底座（定子）組成，通過閥切換保證恒定的流速
分析液相多數配自動進樣系統，自動進樣系統具有進樣精度高、重現性好、可用于大量樣品分析等特點。
分離系統：包括色譜注、柱溫箱，連接管線等部件。
色譜柱一般用內部拋光的不銹鋼制成。其內徑為2～6mm，柱長為10～50cm，柱形多為直形，內部充滿3～10 μm高效微粒固定相，根據不同的實驗需求需要選擇不同填料、不同規格的色譜柱。
柱溫箱：保證分離系統的溫度恒定，降低溫度波動對色譜基線、保留時間及色譜分離的影響，包括普通柱溫箱及帶有冷卻功能的柱溫箱，普通柱溫箱可以根據方法需求設定高于室溫的溫度（一般應高于室溫5℃以上），降低柱壓或是改善色譜分離，帶有冷卻功能的柱溫箱可以升高柱溫外,還可以設定低于室溫的溫度，預防穩定性差樣品的降解，各品牌柱溫箱的控溫范圍略有差別，需要通過相應產品說明書或咨詢客服了解。
需要特別注意的是有些品牌的柱溫箱是沒有配置預加熱模塊的，對于溫度敏感的樣品需要在柱前連接一段管線，對流動相進行預加熱，管線長度及內徑需適當，盡量降低死體積。
檢測器：包括紫外可見吸收檢測器(UVD)、熒光檢測器(FD)、蒸發光檢測器（ELSD）、示差折光檢測器(RID)、電化學檢測器(ED)、化學發光檢測器(CD)、質譜檢測器（MS）等類型，其技術要求為靈敏度高、噪音低、線形范圍寬、響應快。
紫外可見吸收檢測器(UVD)：波長范圍190～800mm，190～400mm為紫外區域，氘燈，400～800mm為可見光區域，鎢燈。其特點為靈敏度高，最小檢測濃度10-9g/ml，線性范圍寬，對溫度和流速不敏感，可進行梯度洗脫，應用范圍廣。適用于帶有共軛基團的化合物，為最常用的檢測器。
熒光檢測器(FD)：氘燈作激發光源，波長范圍250～600nm。其特點為靈敏度更高，檢測限10-12～10-13g/ml（靈敏度比UV檢測器高2～3個數量級），選擇性好，對溫度和流速不敏感，可進行梯度洗脫，所需試樣量少，適于痕量分析，應用于組分吸收一定波長紫外光后發射熒光的物質，且熒光強度與濃度成正比。