HPLCICPMS和HPLCAFS助力食品安全檢測

　　近期，天津濱海新區召開2011年度科學技術獎勵大會，隆重表彰為濱海新區科技發展作出突出貢獻的單位和科技工作者。天津檢驗檢疫局動植物與食品檢測中心申報的天津檢驗檢疫局重點科技項目《食品安全關鍵因子的新型檢測技術研究與應用》(TK041-2009)榮獲科學技術進步獎二等獎。

　　該項目針對目前使用較廣泛的有機砷、有機汞獸藥和有機錫農藥，采用的是兩種最先進的元素形態分析聯用技術，方法研制成功，滿足了國內及進出口檢驗工作需要，同時，這一高難度檢驗方法的研制還顯示了檢驗檢疫部門高水平的檢測技術，填補了國內的技術空白。

　　課題組成員正在進行試驗操作

　　微生物實驗室檢驗人員進行食品微生物項目無菌操作

　　在現代化食品生產過程中，農、獸藥，重金屬、致病菌污染食品，危害人類健康。在食品安全中當前急需解決的問題有農、獸藥，致病菌以及未獲審批的轉基因玉米的檢測方法的建立。

　　隨著世界貿易的快速發展和各國對食品安全問題的進一步關注，日本肯定列表中對有機砷獸藥(硝苯砷酸和洛克沙砷)以及有機錫類農藥(三唑錫、三環錫、三苯錫和苯丁錫)要求檢測。美國FDA也要求對動物產品中的有機砷殘留進行檢測。二硝基苯胺類除草劑已被瑞典禁止注冊，丹麥于1998年也已經禁止了氟樂靈的使用，其他國家也相應制定了二硝基苯胺類除草劑最高殘留限量。而阪崎桿菌引發的腦膜炎、敗血癥和壞死性小腸結腸炎的病例在全球范圍內相繼出現，僅在2004年的上半年就召開了兩次關于嬰兒配方奶粉中阪崎腸桿菌的全球及區域性會議，研討乳品中阪崎腸桿菌的污染、污染源及檢測方法等問題。

　　這些國家對未經過安全評價的轉基因產品實施零允許量。因此，非常迫切需要解決食品安全中的關鍵因子的檢測方法研究。加強食品的安全衛生檢測，是保證人們健康，改善人們生活的必要手段。

　　近十年來，我國相繼引進了國外較先進的儀器設備，并積極采用先進的樣品前處理技術，使得我國在食品安全因子的檢測技術領域發展很快，在許多方面已達到國際水準。但從整體來看，我國的相應檢測技術與發達國家相比，仍然非常落后。因此，我國在相關領域的前瞻性探索以及應用性研究任重而道遠，開展《食品安全關鍵因子的新型檢測技術研究與應用》的研究工作，旨在加快食品安全因子檢測的相關新技術的研究開發，增強自主創新能力，推動我國相關領域的檢測水平盡早與國際接軌，適應現實的需求。

　　該項目以食品安全關鍵因子檢測的相關新技術的研究開發為主線，針對食品中有代表性的安全因子，在有害元素、農藥殘留、致病菌及轉基因檢測4個方面建立了相應的新型檢測技術。該項目在結題后實現了大量技術創新，部分技術和成果達到國際領先水平，彌補了國內技術空白。在國內外核心期刊上共發表論文9篇，申請ZL5項，制定檢驗檢疫行業標準3項。

　　本項目針對目前使用較廣泛的有機砷、有機汞獸藥和有機錫農藥，采用的是兩種最先進的元素形態分析聯用技術，方法總體水平達到國際先進水平，此課題為有關部門提供了一個可靠的檢驗手段和依據。另外，本研究采取的檢測手段可以為其他元素形態分析方法提供參考，檢測方法也可以給系統內外有關試驗用以參照。研究過程中形成的標準已經成為檢驗檢疫行業標準，這就意味著全國32個直屬局及其分支局只要進行這些項目的檢測就必須采用這些標準。因此其社會效益顯著。

　　該項目研究建立的不對稱引物恒溫擴增法在靈敏度、特異性和檢測范圍等指標上相當于或優于PCR技術，檢測成本遠低于熒光定量PCR 技術，尤其適合現場快速檢測的需要。實驗裝置簡單，僅需要普通水浴鍋或者其他得到穩定熱源的設備即可;結果觀察客觀且不需使用電泳儀等設備，只需要通過試紙條的顯色即可進行結果判讀，簡單、快速。總體而言，是一種既有PCR反應的高通量、高靈敏度，又具有免疫學檢測的特異性好、操作簡便又不需要任何復雜儀器的快速檢測方法。從而使得有關的檢測工作能在口岸快速篩查、基層或偏遠經濟不發達地區順利開展，為出入境病原微生物檢測方法體系的建立提供一種新的手段，為口岸快速篩查病原菌，及時發現問題解決問題提供技術支持。

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　　研究重點

　　元素形態檢測。以HPLC-ICP-MS聯用技術，同時檢測動物源性食品中的阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷殘留量;采用酸、堿提取液提取樣品中的硫柳汞，以HPLC-AFS聯用技術來檢測其含量。

　　農藥殘留檢測。根據二硝基苯胺類除草劑的特性及植物源性食品中殘留限量選擇合適的檢測方法，并結合靈敏度和多殘留檢測的要求對不同基質進行相應的前處理步驟的摸索，最終確立植物源性食品中二硝基苯胺類除草劑多殘留檢測方法。

　　致病菌及轉基因檢測。建立了一種新型阪崎腸桿菌快速篩選檢測方法——不對稱引物恒溫擴增法結合免疫金標檢測方法;使用一種快速簡便，靈敏度高，特異性強的環介導等溫擴增技術，檢測轉基因玉米MIR604，MON890034和3272。

　　成果創新

　　■采用了兩種先進的元素形態分析聯用技術(HPLC-ICP-MS和HPLC-AFS)，提高了元素形態分析的能力。

　　■改進優化了二硝基苯胺類除草劑提取、凈化技術，在食品基質中建立了十二種二硝基苯胺類除草劑的同時檢測方法。

　　■建立了不對稱引物恒溫擴增法。在靈敏度、特異性和檢測范圍等指標上相當于或優于PCR技術，檢測成本遠低于熒光定量PCR技術，尤其適合現場快速檢測的需要。

　　■在檢測結果觀察上利用免疫金標檢測技術，避免環介導等溫擴增使用肉眼觀察沉淀的不客觀性，PCR需要電泳觀察及熒光PCR對儀器的依賴，在10至15分鐘內就可呈現出清晰的條帶，使核酸擴增物的檢測周期大大縮短。