1. 準備好一根DEAE-Affi-Gel Blue柱子。用5倍柱床體積的加樣緩沖液平衡(7 ml 柱床體積/ml 抗血清或腹水)。此步驟及以下各步均在4℃下操作實施。 2. 于4℃下透析樣品40 h,中間換2次加樣緩沖液(每次換大約4 L)加樣上柱,速度為10 ml/h。用3倍柱床體積的加樣緩沖液以10 ml/h 的速度洗脫未結合的蛋白質。
3. 用洗脫緩沖液以10 ml/h 的速度洗脫結合的IgG組分,以10 ml 為一組分分部收集洗脫液,并貯存于4℃,直至合并各組分。 4. 每組分取30~50 μl,用10%SDS-PAGE在還原條件下檢測組分中是否含有IgG,合并含有IgG的組分,在4℃下透析大于40 h,期間換2次緩沖液。 5. 用5倍柱床體積的加樣緩沖液重新平衡DEAE-Affi-Gel Blue柱,加少許NaN3晶體, 貯存于4℃。 展 |