【基本原理】
IL-1具有刺激多種來源的成纖維細胞增殖的作用，可用于IL-1生物活性檢測。目前國內外大多數實驗室常用L929細胞株（小鼠成纖維細胞瘤細胞）作為檢測IL-1生物活性的靶細胞或反應細胞。MTT比色法的原理是利用四甲基偶氮唑鹽[3-（4.5-dimethylthiazol-2-
yl）-2，5-diphenyl tetrazolium
bromide，MTT]在活細胞線粒體的琥珀酸脫氫酶作用下，由淡黃色被還原成藍紫色或藍黑色的MTT-甲肷，形成的量與活細胞代謝率及細胞增殖程度成正相關。故通過反應細胞形成的MTT-甲肷量，即可測定IL-1對L929細胞促增殖作用程度，從而間接測定IL-1的生物活性。
【材料和試劑】
（1）已誘生的IL-1待檢樣品：倍比稀釋成不同濃度。
（2）IL-1標準品：倍比稀釋成不同濃度。
（3）L929細胞：作為反應細胞或靶細胞，存活率應>95%。
（4）0.25%胰蛋白酶
（5）10%FCS-RPMI-1640完全培養液
（6）MTT：用PBS稀釋成5mg/ml，用0.22μm膜過濾除菌及雜質，4℃避光保存。
（7）酸化異丙醇（含0.04mol/L HCl的異丙醇）：100ml異丙醇中加入0.4ml的36% HCl即可。
（8）96孔細胞培養板，刻度吸管，毛細吸管，加樣器（頭），刻度離心管，離心機，細胞計數板，倒置顯微鏡，5%CO2培養箱，超凈工作臺，酶標測定儀，570nm與630nm濾光片。
【操作步驟】
（1）將生長狀況良好的L929細胞用0.25%胰蛋白酶消化2-3min；
（2）將L929細胞用10%FCS-RPMI-1640培養液洗滌2次，以去除消化液及原生長培養液；
（3）用10% FCS-RPMI-1640培養液調L929細胞濃度為2×105/ml；
（4）將L929細胞懸液加至96孔細胞培養板，100μl/孔；
（5）分別加入不同倍比稀釋度的IL-1標準品和待測樣品于96孔細胞培養板中，100μl/孔，各設3個復孔，同時設立培養液空白對照；
（6）置37℃，5% CO2培養箱中培養56h；
（7）將96孔培養板取出，各孔加入MTT，10μl/孔；
（8）置37℃，5% CO2培養箱中繼續培養4h；
（9）取出培養板，先從各孔中輕輕吸出100μl上清液棄去，再加入酸化異丙醇或DMSO，100μl/孔，置室溫10~20min，吹打震蕩，充分混勻，使 MTT-甲肷產物充分溶解；
（10）用酶標儀以檢測波長570nm，參考波長630nm，分別測定各孔OD值。測定應在酸化異丙醇加入后lh內完成。
【結果分析】
（1）每孔OD值應為OD570nm-OD630nm，再減去培養液對照OD值，最終每孔OD值應取3復孔的平均值；
（2）以log2[稀釋度]為X（橫座標），各稀釋度對應的OD值為Y（縱座標），在普通坐標紙上，分別繪制出IL-1標準品與待測樣品兩條回歸曲線（如圖）。
IL-1標準品與待測樣品兩條回歸曲線
（3）經標準品最大OD值一半處（即標準品50%最大OD值處）的A點畫一條平行于X軸的橫線，由此產生相關于待測樣品回歸曲線的B點；
（4）A點與B點所對應的橫軸上的值為X，因X=log2[稀釋度]，則A點與B點對應的稀釋度值為：稀釋度=2X，求得稀釋度。
待測樣品IL-1活性單位計算公式：
待測樣品IL-1活性
（U/ml）
=
B點對應的樣品稀釋度
×
標準品IL-1活性（U/ml）
A點對應的標準品稀釋度
或者采用下列公式計算:
待測樣品IL-1活性
（U/ml）
=
達標準品50%最大OD值對應的樣品稀釋度
×
標準品IL-1活性
（U/ml）
達標準品50%最大OD值對應的標準品稀釋度
【注意事項】
（1）L929細胞存活率應>95%，L929細胞在培養條件不良時，可呈圓形漂浮狀，此時更換培養液可使其恢復為正常的梭形貼壁細胞。
（2）應充分洗滌后加入培養板中，且應均勻分散于各孔中，否則可能造成某個部位細胞過密而某個部位細胞過稀，影響細胞單層形成。
（3）標準品及待測樣品應從1:2開始至少6個倍比稀釋度。
（4）加樣時，應從低濃度到高濃度順序加入，不可共用加樣器頭。
（5）加入酸化異丙醇后，應在lh內進行OD值測定。
（6）還可按正態概率紙法或概率單位法計算IL-1的活性單位。