LCMS／MS方法檢測動物組織中β興奮劑類藥物

衛生部近日匯總公布了《食品中可能違法添加的非食用物質和易濫用的食品添加劑品種名單》，上海月旭公司從公布的黑名單中統計發現，包括三聚氰胺、蘇丹紅、孔雀石綠、人工合成色素等都在內。針對這些令人觸目驚心的食品添加劑，同時也為食品安全檢查和監管工作提供有力的技術支持和保障，上海月旭公司迅速組織相關人員研制出了方便、快速、準確的檢測方法，現將LC-MS/MS檢測動物組織中β-興奮劑類藥物的方法公布如下：

1. 適用范圍

適用于動物組織中鹽酸克倫特羅和萊克多巴胺藥物的檢測。

2. 提取

將5g動物組織、15 mL乙酸乙酯、3 mL10%碳酸鈉溶液置于50 mL離心管中，10000 rpm均質2 min。6000 rpm下離心2 min，將上清液轉至另一離心管中。用15 mL乙酸乙酯重復提取一次，合并提取液。

向乙酸乙酯提取液中加入5 mL 0.1 mol/L的鹽酸溶液，渦動1 min，然后再6000 rpm下離心1 min，收集下層水相。重復萃取一次，合并下層水相，用2.5 mol/L NaOH溶液調節pH至5.2，待凈化。

3. 凈化

活化/平衡：依次向Welchrom? P-SCX(60mg/3mL)中加入3 mL甲醇、3 mL水和3 mL 30 mmol/L鹽酸溶液，流出液棄去;

上樣：將上述提取液加入柱中，流出液棄去;

淋洗：依次用3 mL水、3 mL甲醇淋洗，淋洗液棄去，并將小柱抽干;

洗脫：用2×2 mL 5% 氨化甲醇洗脫，收集洗脫液，40℃下氮氣吹,50%乙腈復溶，過0.22μm濾膜，待分析;

4. 色譜質譜條件

4.1 色譜條件

色譜柱： Ultimate XB-C18 液相色譜柱(2.1mm* 100 mm, 3 μm)

流動相：

A: 0.1%甲酸水溶液

B：乙腈

梯度洗脫，程序見右圖：

流速： 0.2 mL/min

進樣量： 10 μL

柱溫： 35 °C

運行時間：12 min

4.2 質譜條件

掃描模式：MRM

離子源：ESI+

毛細管電離電壓：3.20 Kv

孔電壓(cone)：45 V

電離源溫度：100 ℃

脫溶劑溫度：300 ℃

錐孔氣流速：50 L/Hr

脫溶劑氣流速：450 L/Hr

名稱 母離子 子離子 孔電壓 (V) 碰撞電壓(eV)

駐留時間

(ms) 定量離

子對 定性離

子對

鹽酸克倫特羅 277.2 167.8 20 28 100 - +

203.0 20 16 200 + -

萊克多巴胺 302.17 106.8 18 28 100 - +

164.1 18 14 200 + -

鹽酸克倫特羅-D9 288.2 209.2 22 16 100 +

萊克多巴胺-D3 305.2 167.1 18 14 100 +

5. 結果

5.1 回收率和重現性實驗

將豬肌肉空白樣品經過液液萃取初步處理后，分別添加一定量的標準溶液，添加濃度分別為0.5μg/kg、1μg/kg、5μg/ kg、每批次內同一濃度做3次平行實驗，共3個批次(樣品典型回收率色譜圖見附圖)。

圖1 豬肌肉中添加0.1 mg/kg 鹽酸克倫特羅EIC譜圖 圖2 豬肌肉中添加0.1 mg/kg 萊克多巴胺EIC譜圖

本方法中使用到得耗材：

1. 固相萃取小柱 Welchrom? P-SCX 60mg/3mL (P/N:WSP020306)

2. 色譜柱：Ultimate XB-18,50*2.1mm，3μm(P/N:Ult3B18205)

3. 13mm，孔徑0.22μm尼龍針孔濾膜(P/N: WEL-SFNY213022)

4. 12孔固相萃取裝置(WEL-Vac-12)