基因芯片
生物芯片是指采用光導原位合成或微量點樣等方法,將大量生物大分子比如核酸片段、多肽分子、組織切片、細胞等等生物樣品有序地固化于支持物(如玻片、硅片、聚丙烯酰胺凝膠、尼龍膜等載體)的表面,組成密集二維分子排列,然后與已標記的待測生物樣品中靶分子雜交,通過特定的儀器比如激光共聚焦掃描對雜交信號的強度進行快速、并行、高效地檢測分析,從而判斷樣品中靶分子的數量。
其反應原理是堿基A-T,C-G間互補配對
而傳統芯片的優勢和用途是高通量和快速檢測。主要應用與大規模檢測基因表達差異和大規模藥物篩選。但其最大缺點是產生大量假陽性假陰性;同時不是”有”或”無”的結果,使得檢測結果的判斷非常困難;重復性極差,一般一個樣品需重復三次才能做出綜合評價。
基于高溫連接酶檢測反應的基因芯片
原理:當檢測到DNA與互補的兩條寡聚核昔酸接頭對應處存在著堿基錯配,則連接反應就不能進行。如圖,在同時存在著Cy5標記與Cy3標記的探針時,由于前者與模板DNA互補,故它與下游探針的連接反應得以進行,而后者則無法與下游探針連接。在連接反應結束后進行芯片雜交,檢測到的結果即為Cy5,從而可認定該SNP位點為A。
與傳統芯片結果比較:結果唯一確定,非此即彼;沒有假陽性假陰性結果;操作簡單,結果穩定,可重復性強。
優點
操作簡單:對技術人員沒有特殊的技術要求,只要接受簡單的分子生物學操作培訓即可;
成本低:使用本檢測系統只需現有的PCR儀等分子實驗室儀器即可,無需再投入大量的資金購置儀器。
準確度高:與其他芯片技術的假陰性假陽性相比,LDR技術可以比較準確的檢測出DNA多態性;
靈敏度高:點突變率達到1/10-1/50即可檢驗到,這是測序檢測所無法比擬的。
所開發的項目
化療藥物療效和毒副作用相關位點檢測芯片;新生兒氨基糖苷類抗生素致聾檢測芯片;乙肝病毒分型及YMDD突變檢測芯片;心血管病相關易感基因位點檢測芯片。