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  • 發布時間:2019-03-26 17:40 原文鏈接: M13噬菌體衍生載體的制備實驗——載體衍生法

    M13噬菌體是一種絲狀噬菌體,感染宿主后不裂解細菌細胞,只利用細胞內物質完成自身增殖,組裝成完整病毒顆粒后被宿主細胞分泌而出,宿主細胞仍能繼續生長分裂。為分子生物學中理想的質粒載體。基因間隔區的有些核苷酸序列即使發生突變、缺失活插入外源DNA片段,也不會影響M13DNA的復制,這為M13DNA構建克隆載體提供了條件。


    實驗材料

    質粒

    試劑、試劑盒

    YT培養基

    儀器、耗材

    離心機分光光度計搖床

    實驗步驟

    1.  將來自一個單菌落的過夜培蕎新鮮菌液按1 :50稀釋,在含有適當抗生素的2xYT培養液(1~5 ml)中,于37℃培養至OD600=0.1。

    2.  按1,10,20,50 MOI感染細胞,于37℃劇烈振蕩下培養4.5 h。

     

    3.  4 000 g 離心10 min,收集上請液并于65℃加熱滅活15 min。

     

    4.  從上清液中提取單鏈DNA,在瓊脂糖凝膠上分析單鏈DNA,并用輔助噬菌體作為對照。


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