結果與討論
樣品前處理條件的確定
糖皮質類激素屬于一類脂溶性激素，在結構上都是環戊烷多氫菲衍生物。所以選擇采用乙酸乙酯作為提取溶劑能夠實現從動物組織中有效的提取此類藥物。由于此類化合物具有較強的非極性，在 HLB 柱上有較強的非極性保留作用，所以實驗采用低洗脫強度的甲醇 / 水溶解樣品提取物轉移上 HLB 柱，依次用水和 50% 甲醇水溶液洗除極性、中等極性的樣品基質雜質，再用甲醇 / 乙腈混合溶劑把糖皮質類激素藥物洗脫下來，而部分動物油脂等非極性雜質保留在 HLB 上，從而實現了糖皮質類激素的有效凈化富集。
表 1. ACQUITY TQD MRM 參數。
色譜條件的優化
由于 9 種糖皮質類激素化合物極性上存在一定差異，所以采用梯度方法在乙腈 / 水的流動相體系下實現分離，結果見圖 1 。其中潑尼松龍和可的松 (405.2 ﹥ 329.2 ， 405.2 ﹥ 359.2 ) ，倍他米松和地塞米松 (437.2 ﹥ 361.2 ， 437.2 ﹥ 391.2 ) 兩組化合物的母離子和子離子完全一樣，只是在結構上空間異構，在質譜上無法區分，所以必須通過色譜實現分離后定量定性分析，實驗優化了梯度程序、色譜柱溫及流速，使兩組化合物實現了基線分離，從而能夠準確定性和定量測定。
質譜條件的優化
在 ESI(-) 模式下，糖皮質類激素化合物形成 [M-H+HCOOH]- 形式的分子離子峰，通過碰撞處理，子離子掃描進一步得到定量和輔助定性子離子碎片峰，進而采用 MRM 模式進行監測， MRM 條件參見表 1 。實驗分別對毛細管電壓、錐孔電壓、碰撞能量等參數進行了優化，使方法靈敏度和分辨率滿足檢測需要。
方法的線性范圍、準確度和精密度
9 種糖皮質類激素混合標準品在 1 ng/mL ~ 100 ng/mL 濃度范圍內進樣分析，得到線性方程和相關系數。采用空白樣品添加 10μg/kg 水平下，平行 6 次，計算添加回收率及 RSD ， 結果參見表 2 和圖 2 。
圖 2. 糖皮質類激素標準品、空白樣品、添加樣品總離子流 (TIC ) 色譜圖。
表 2. 糖皮質類興奮劑測定方法線性方程、相關系數、相對標準偏差和回收率。
結論
本文采用 HLB 凈化和 UPLC/TQD 系統建立了快速有效的監測動物性食品中 9 種糖皮質類激素的全分析方案。 Oasis HLB 能夠有效地對動物性樣品進行凈化和富集，除去油脂、蛋白等基質干擾，提高了方法靈敏度，降低了基質效應； UPLC/TQD 系統在 6.5 min 內實現了高效分離和快速測定，同時實現了準確定量和確證的目的。為奧運動物性食品中糖皮質類激素的監測提供了有力的技術支持和參考，也對其它類型食品的監測提供有意義的借鑒
參考文獻
? Vaerie A.Frerichs,Kathleen M.Tornatore. Journal of ChromatographyB,802(2004) 329-338.
? Van den hauwe,F.Dumoulin,J.P.Antignac,M.P.Bouche,C.Elliott,C.Van Peteghem. Analytica Chimica Acta,473(2002)127-134.
? Olivia Van den hauwe,Manuela Schneider,Ali Sahin,Carlos H.Van Peteghem. J.Agric. Food Chem,51(2003)326-330.