一、PBMC細胞計數的現狀
1. 目前，絕大多數的科研工作者仍在使用血球計數板在顯微鏡下進行手工計數PBMCs；
2. 但是顯微鏡下由于白細胞和紅細胞大小非常接近，不能完全區分白細胞和紅細胞；
3. 通過紅細胞的雙凹形形態鑒別紅細胞，需要經驗豐富的操作者，且不停地調焦來鑒別；可想而知要把每個紅細胞鑒別出來，要耗費多長的時間，需要多強的工作量。
PBMC樣本的差異性大
由于個體的差異（如正常人和病人）和人工分離提取的差異，紅細胞和血小板污染的程度差異性非常大，因此我們經常看到分離后的PBMC樣本千差萬別（見下圖），這也大大增加了在同一條件下，簡單快速準確計數PBMC的難度和檢測PBMC活性的難度。
二、PBMC精確計數或活力分析的重要性
PBMC（外周血單個核細胞）是免疫學功能研究中最常用的細胞模型，如細胞增殖、細胞毒性、細胞因子分泌等。
如在癌癥免疫治療領域中，需從病人全血中分離出PBMC，分離的PBMC進一步擴增或進行不同的功能檢測。激活擴增后的細胞再回輸到病人體內進行細胞治療。在整個流程中，從分離到檢測，到培養，到回輸等過程，細胞濃度和細胞活力都是必須監測的參數。
密度梯度分離液是從外周血、骨髓，及臍血分離單個核細胞最常用的方法。但是不可避免的，分離后的細胞中，會有殘存的紅細胞及血小板混合在單個核細胞中。殘存的紅細胞和血小板的多少，與個體的差異，以及分離的效果相關；但是不管分離的技術多高超，經驗多豐富，都不可避免會存在紅細胞和血小板的污染。
PBMC實驗的特征
1. 隨著時間的延長，細胞質量下降；
2. 臨床試驗相關的樣品量很大；
3. 細胞樣品不純，分離之路依賴病人樣本和操作者
如何精確、快速、簡便計數PBMC以及精確分析PBMC活力，是免疫學研究以及免疫治療領域至關重要的步驟。
1. 使用血球計數板在顯微鏡下進行手工計數PBMC，即耗時耗人力，更不能達到精確計數的目的。
2. 通過明場的常規細胞計數儀同樣不能區分紅細胞，不能達到精確計數PBMC和精確活力分析的目的。
3. 迫切需要快速、簡便、精確計數PBMC的工具替代人工計數。Nexcelom公司走在了市場領先的位置，在常規明場的細胞計數儀基礎上，開發出了雙熒光細胞活力分析儀，可通過AOPI染料進行PBMC的快速精確計數和活力分析。
參考文獻
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