PCR實驗方法步驟

PCR在分子克隆和DNA分析中有多種用途，下面小編就向大家介紹PCR實驗方法步驟：

方法

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  在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。      

  10×PCR buffer                    

  5 μl     dNTP mix （2mM）              

  4 μl     引物1（10pM）                  

  2 μl     引物2（10pM）                  

  2 μl     Taq酶 （2U/μl）                

  1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）   

  1 μl      加ddH2O至 50 μl   

  視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
  

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  調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，最后在72℃ 保溫7min。
  

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  結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

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  PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。