一次pcr的時間不是固定的,要根據循環數決定。一般一次pcr需要70-90分鐘,如果加上前面加樣時間,一般兩個小時左右。一般染料法定量pcr在進行完pcr后都要運行熔解曲線,一般設定先94度幾分鐘,然后驟冷到65度（假定65度為退伙溫度）.在65度時,pcr產物是以雙鏈的形式存在的。因為染料是插到雙鏈dna的小溝里然后發熒光的,所以這個時候檢測到很強的光信號,隨著溫度升高,雙鏈逐漸打開,熒光信號逐漸減弱。
