PCR中退火的那步是引物與模板結合，一般來說，退火溫度比Tm值要低上5度左右。另外，也可以根據你設計引物的軟件比如primer5.0或Olige 6 推薦的溫度。但這些都不是絕對的。你要是在他的推薦溫度下沒有目的條帶，你可以試試做一個溫度梯度，摸索一下退火溫度。
