PCRSSP分析實驗

模板DNA

Taq 聚合酶 丙烯酰胺 電極緩沖液 上樣緩沖液

PCR 擴增儀 電泳儀 電泳槽

1.PCR擴增PCR反應體系為20μl（2個體系，分別為引物1和引物2），含模板2μl(約50ng)，引物各1.5μl,dNTP1.6μl(0.4mM)，10×Buffer緩沖液2μl，Taq酶1.0U，加雙蒸水至20.0μl；PCR反應條件為94℃4min,94℃1.5min/52℃2.0min/72℃2.0min，30個循環。

2.PCR 擴增產物的檢測 取PCR 擴增產物2μl，6%聚丙烯酰胺凝膠電泳（T=6%，C=3.3%，凝膠規格為82mm×64mm×0.75mm）。電極緩沖液為1×TBE。將加有1/5 體積上樣緩沖液的酶切產物電泳，220 v 電壓，電泳2－3h。銀染顯色

①如引物結合序列存在堿基變異可能無擴增產物，導致錯誤判型；②在對照樣品分型準確的基礎上才能判定結果。

1、如引物結合序列存在堿基變異可能無擴增產物，導致錯誤判型。

2、在對照樣品分型準確的基礎上才能判定結果。

該方法操作簡單，引物設計與實驗的復性條件要求較高。