一、細胞表達檢測
1. 分別取對數生長期的HepG2和Hep3B細胞，以不同濃度的DOX單用或與RAPA（20 nmol/ml）聯合應用培養48 h或24h。
2. 以MTT法測定藥物對HepG2和Hep3B細胞的增殖抑制作用，以流式細胞技術檢測二者的凋亡情況，以 Western blot法檢測者P-p70S6K（T389）、P-4E-BP1（S65）和pS6（S235/236）的表達改變。 二、細胞表達結果
1. 0.156～2.5 mg/L濃度范圍內，DOX能抑制HepG2和Hep3B細胞的增殖，且呈濃度依賴性；DOX在0.625～10mg/L濃度范圍內，Hep3B細胞的相對存活率顯著大于HepG2細胞（P<0.01）。
2. 與DOX單用比較，DOX（0.156～2.5 mg/L）與RAPA聯用顯著降低了HepG2和 Hep3B細胞的存活率（P<0.01或P<0.05），DOX（0.156～10mg/L）與RAPA聯用，Hep3B細胞存活率顯著大于 HepG2細胞（P<0.01）。
3. DOX（0.156～10 mg/L）單用或與RAPA聯用24h均可誘導HepG2和Hep3B細胞凋亡發生，且 隨DOX濃度增加，凋亡牢升高。
4. 與DOX單用比較，DOX（1.25～10 mg/L）與RAPA聯用，HepG2細胞捌亡率較顯著升高 （P<0.01或P<0.05），DOX（2.5～10 mg/L）與RAPA聯用，Hep3B細胞凋亡率顯著升高（分別P<0.05）。
5. DOX（5.0～10mg/L）單用，HepG2細胞凋亡率顯著大 于Hep3B細胞（分別P<0.05），DOX（2.5～10 mg/L）與RAPA聯用，HepG2細胞凋亡率顯著大于Hep3B細胞（分別P<0.01）。
6. RAPA（20nmol/L）、DOX（2.5mg /L）以及二者聯用均可導致HepG2或Hep3B細胞P-p70S6K（T389）、P-4E-BP1（S65）和pS6（S235/236）表達減 少，且以DOX與RAPA聯用效應最為明顯。 三、細胞表達結果分析
1. DOX可抑制HepG2和Hep3B細胞生長增殖，促進細胞凋亡，下調PI3K/Akt/mTOR信號通路的活化程度。
2. DOX與 RAPA聯合用藥能顯著抑制HepG2和Hep3B細胞的增殖，促進細胞凋亡，下調PI3K/Akt/mTOR信號通路的活化程度，并在一定濃度范圍內表 現出協同效應。
3. 在一定濃度范圍內，HepG2細胞對DOX單用或與RAPA聯合用藥的敏感性顯著高于Hep3B細胞，可能與HCC細胞p53的表達 差異有關。 展開 | 