PNAS：病毒小RNA抑制登革病毒復制

　　每年有超過100個國家報道了近100百萬例登革病毒(Dengue virus，DENV)感染性疾病，包括50萬例登革出血熱。伊蚊屬的埃及伊蚊(Aedes aegypti)和白紋伊蚊(Aedes albopictus)是DENV的主要傳播者。MicroRNA(miRNA)是一類具有調控功能的小RNA，在眾多的細胞過程中發揮重要作用。在宿主和病原體間無休止的“軍備競賽”中，病毒也會編碼miRNA幫助其成功的侵染。為尋找DENV編碼的功能性miRNA或病毒小RNA(vsRNAs)，來自澳大利亞昆士蘭大學的研究團隊采用小RNA測序技術對DENV侵染的A. aegypti中的小RNA表達譜進行了深入挖掘和功能分析*，研究成果發表在近期的PNAS上。

　　研究人員首先構建了2個小RNA文庫，分別來自DENV侵染的A. aegypti和對照的A. aegypti，并用高通量測序技術分析其中可能來自DENV編碼的小RNA(小RNA測序項目由聯川生物承擔完成)。測序共發現了484條不同長度分布的vsRNAs，篩選出了6個vsRNAs，它們的候選莖環結構位于病毒基因組RNA的5′與3′非翻譯區。為找出這6個vsRNAs對病毒RNA復制的影響，研究人員合成了與之對應的inhibitor進行抑制實驗，結果發現只在抑制DENV-vsRNA-5時，會導致病毒復制的顯著增加。通過沉默RNAi/miRNA 通路相關的蛋白，發現Argonaute 2主要參與了DENV-vsRNA-5的生物合成。通過前體莖環的克隆，免疫共沉淀，對RNAi通路缺陷C6/36細胞(來自A. albopictus)以及哺乳Vero細胞系(非洲綠猴)中病毒小RNA檢測和分析，均證實了DENV-vsRNA-5的存在。不僅如此，通過分析DENV-vsRNA-5的 mimics和inhibitor對DENV RNA表達水平的影響，也揭示出DENV-vsRNA-5在病毒自我調節中的作用，該小RNA可靶向調控DENV的非結構蛋白1基因。值得注意的是，來自 DENV血清型1和4，而非3的DENV-vsRNA-5同源mimics可以抑制DENV-2的復制。

　　上述研究結果表明，DENV可以編碼功能性vsRNAs，其中的一個病毒小RNA，有類似于miRNA的功能，可以特異地靶向調控病毒基因。這為未來使用小RNA抑制DENV復制開辟了一條新途徑。