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  • 發布時間:2019-03-28 14:45 原文鏈接: PVDF膜上蛋白的可逆染色

    PVDF膜上蛋白的可逆染色可以用于:Western雜交時,確認蛋白是否轉至PVDF膜上。

    實驗方法原理麗春紅帶負電荷,可以與帶正電荷的氨基酸殘基結合,同時也可以與蛋白質的非極性區相結合,從而形成紅色的條帶。
    實驗材料

    蛋白

    試劑、試劑盒

    AmidoBlackisopropanolaceticacid考馬斯亮藍methanolPonceau S in TCAEtOHHACNa2S2O3AgO3Na2CO3MeOHAgNO3甲醛

    儀器、耗材

    PVDF膜

    實驗步驟

    1.  氨基黑染色


    染液:0.5% Amido Black (w/v), 25% isopropa nol (v/v) and 10% acetic acid.


    染色:將 PVDF 膜置于染液中染色數鐘,ddH2O脫色。


    2. 考馬斯亮藍染色


    染液:0.1% Coomassie Brillia nt Blue R-250 (w/v) and 50% met hanol (v/v)


    脫色液:40% met hanol (v/v) with 10% acetic acid (v/v)


    染色:將 PVDF 膜置于染液中染色 15 min.,脫色液脫色。


    3.麗春紅染色 Ponceau S


    染液:0.2% w/v Ponceau S in TCA (3% v/v)


    染色:將 PVDF 膜置于染液中染色 5min


    脫色:ddH2O脫色

     

    展開 
    注意事項

    麗春紅染色液不適用于尼龍膜上蛋白的檢測。

    其他

    麗春紅的染色靈敏度不如考馬斯亮藍染色液。


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