3.3 平行反應監測（PRM）
平行反應檢測（PRM）高分辨定量通過四極桿對目標化合物進行選擇性通過，
離子在通過后立即進入碰撞池并發生高能碰撞碎裂，所產生的碎片將被同時送入 Orbitrap 進行高分辨掃描，然后選擇高分辨的二級子離子進行定量。該定量方法的特點為，在四極桿過濾掉大量干擾離子提高了靈敏度的同時，二級高分辨質譜進一步提高了定量的專屬性。
為更好的進行PRM定量，需要選擇出高質量的定量子離子，采用 Q Exactive Focus 對目標雜質 N-（二甲基金剛烷）甘氨酸進行二級碎裂，在獲得了高質量的二級質譜圖后，將其導入專業的小分子結構解析軟件 Mass Frontier 7.0，可快速準確的完成對不同碎片離子及其所對應的結構進行自動推測（圖 9）。
圖 9. Mass Frontier 自動歸屬二級質譜碎片
該軟件含有 Fragmentation Library 碎裂數據庫，該數據庫幾乎涵蓋了所有已發表的文獻，在快速完成碎片結構歸屬的同時，可以獲得完整的碎片裂解機理，并可方便的調用查看所引用的文獻情況，保證了碎片解析的準確性（圖 10）。
圖 10. Fragmentation Library 提供碎片裂解機理
由以上分析可知， m/z 107.0855 和 163.1481 的碎片具有較高的質量，作為 PRM 定量的首選離子。
進一步，通過比對 N-（二甲基金剛烷）甘氨酸二級質譜和6.2 min 干擾離子的二級質譜圖（圖 11）發現， m/z 107.0855 碎片離子同時存在于兩者之中（藍色虛線框部分），以此離子定量無法有效區分目標化合物和干擾離子，而m/z 163.1481 碎片離子只存在于目標化合物二級質譜圖中（紅色虛線框部分），以此離子定量，具有更高的專屬性。
圖 11. N-（二甲基金剛烷）甘氨酸和干擾峰二級質譜比對
通過比對 SIM 定量和 PRM 定量效果，通過采用子離子m/z 163.1481 進行 PRM 定量，可更好的去除背景干擾，獲得更高的專屬性（圖 12）。
圖 12. 不同定量方式和不同的子離子選擇情況下提取離子流比對
4. 結論：
4.1 本方法采用 Q Exacitve Focus 進行高分辨定量，獲得了出色的定量結果。全掃描定量線性范圍為 1.2 ng/ml~12 μg/ml，R2=1.000，每個濃度點和線性的偏差小于 5%，且無論是高濃度還是低濃度都獲得了小于 4% 的 RSD；選擇離子監測 SIM 通過四極桿過濾背景干擾并篩選目標母離子進行累積，可使定量靈敏度提高至 0.12 ng/ml，比進口注冊標準提高 200 倍，整個線性范圍高達 5 個數量級；平行反應監測 PRM 通過四極桿過濾背景
干擾并篩選目標母離子累積后進行高能裂解，進而獲得高質量的二級子離子全掃描信息，在保證了靈敏度的同時，有效的排除同質異素甚至同分異構的干擾，獲得更高的專屬性。
4.2 Q Exactive Focus 將高性能四極桿與高分辨 Orbitrap 技術相結合，具有高達 70,000 FWHM 的分辨率和長期穩定的高質量精度，即使在雜質極低含量的情況下，仍可獲得高質量的一級和二級高分辨質譜數據，保證了定性和定量結果的可靠性；媲美高端三重四極桿的靈敏度和寬線性范圍可輕松定量藥物中的痕量雜質。與三重四極桿質譜相比， Q Exactive Focus 采用一級質譜定量不需要優化母離子，子離子參數，僅利用目標化合物精密分子質量即可實現準確定量，更為方便快速。采用二級高分辨質譜定量可以記錄子離子全掃描信息，通過在數據后處理中靈活的挑選更具有專屬性的子離子進行定量，有效的排除基質干擾，選擇性更好，靈敏度更高。