| RNAi RNA干擾是最近發現的一種功能工具。當RNA導入一個細胞時,最終會引起細胞內互補mRNA的降解,從而導致基因功能活性的阻斷。 |
PTGS 轉錄后基因沉默(post transcriptional gene silencing);一種首先在植物中確定,然后發現在動物中也存在的現象。盡管PTGS最初被描述作一種病毒防御和轉位子沉默的內源方法,現在它已經成為一種新的令人激動的研究工具――RNAi干擾。 |
協同抑制(Cosuppression) 基因沉默的一種特殊情況,來源于轉基因的RNA與同源內源基因同時被抑制。 |
靜息作用(Quelling) 用于在粉色面包霉菌(Neurospora crassa)中描述協同共抑制。這個術語僅僅用來在真菌中描述沉默。 |
dsRNA 雙鏈RNA(Double-stranded RNA);通常指長的或者全長的RNA雙鏈。這些大的dsRNA在大多數哺乳動物細胞類型中全面啟動宿主細胞的關閉(shutdown);隨后細胞開始降低非靶標基因的表達,最終經歷凋亡(apoptosis)。 |
siRNA 短的(或者小的)干擾RNA ( Short (or small) interfering RNA) ;哺乳動物細胞參與引起RNAi反應的21-23核苷酸的短的RNA雙鏈。 |
RISC RNA誘導沉默復合體 (RNA-induced silencing complex);即所推測的多蛋白復合物,將siRNA和細胞內mRNA結合到一起,激活裂解機制(可能是內切核苷酸的),釋放mRNA并進行降解。 |
shRNA 短的發夾RNA (Short hairpin RNA);也稱短的干擾發夾 (short interfering hairpin);在體內通過RNAi降低互補序列基因的表達。 |
Pol III 啟動子 Pol III 啟動子 U6或者HI(Pol III promoter,U6 or HI),通常用來驅動shRNA的產生。Pol III 啟動子具有在某一確定起始位點上游啟動轉錄所需要的全部元件。 |
Pol III 終止子 Pol III終止子( Pol III terminator);4個或者更多個T,提供Pol III依賴的轉錄終止。 |
U6 啟動子 U6 啟動子(U6 promoter)一種pol III型啟動子,允許產生確定末端的小RNA(參看pol III啟動子)。 |
入門載體 (entry vector) 包含attL位點,用來克隆DNA片段的Gateway?載體。U6入門載體, pENTR?/U6,專門設計使用U6 pol III型啟動子和終止子序列,RNAi靶序列克隆進入后將在哺乳動物細胞中形成shRNA。 |
目的載體(destination vector) Gateway?適合的目的載體(DEST)包含attR位點,可以與入門克隆進行重組,構建表達載體。BLOCK-iT? RNAi慢病毒和腺病毒 DEST載體接受來自U6入門載體的RNAi框。此外,也有在原核、酵母、昆蟲或者哺乳動物系統表達天然蛋白或者融合蛋白的DEST載體可供選擇。 |
LR Clonase?便于attL和 attR位點在LxR Gateway?重組反應中進行重組的一種酶混合物,可以把DNA序列從入門載體轉移到目的載體。 |