RAPD標記
RAPD技術的全稱是隨機擴增多態性DNA(Random Amplified Polymorphic DNA)，此技術建立于PCR基礎之上，使用一系列具有10個左右堿基的單鏈隨機引物，對基因組的DNA全部進行PCR擴增，以檢測多態性。由于整個基因組存在眾多反向重復序列，因此須對每一隨機引物單獨進行PCR，單一引物與反向重復序列結合，使重復序列之間的區域得以擴增。引物結合位點 DNA序列的改變以及兩擴增位點之間DNA堿基的缺失、插入或置換均可導致擴增片段數目和長度的差異，經瓊脂糖凝膠電泳分離后通過EB染色以檢測DNA片段的多態性。
一、實驗材料
不同來源的DNA(30-50ng/ul)。
二、實驗設備
PCR儀，PCR管或硅化的0.5ml eppendorf管，電泳裝置，凝膠成像儀。
三、試劑
1、RAPD引物：購買成品或根據賽百盛（SBS）公司設計的RAPD引物序列（http://www.sbsbio.com/pro11_1.asp）合成。
2、Taq酶
3、10xPCR 緩沖液
4、MgCl2：25mmol/L。
5、dNTP：2.5mmol/L。
四、操作步驟：
在15ul反應體系中，加入
模板DNA 1ul (30-50ng)
RAPD引物 1ul (約5pmol)
10xPCR Buffer 1.5ul
MgCl2 1ul
dNTP 1ul
Taq酶 0.5單位（U）
加ddH2O 至 15ul
混勻稍離心, 加一滴（約20 ul）礦物油。
2. 在PCR儀中預變性94℃ 2分鐘, 然后循環: 94℃ 1分鐘， 36℃ 1分鐘， 72℃ 1分鐘，共40輪循環。
3. 循環結束后, 72℃ 10分鐘，4℃保存。
4. 在15ul PCR產物中加2ul上樣緩沖液(6x)于1.6% 瓊脂糖膠上電泳, 穩壓50-100Ｖ。
5. 電泳結束，溴化乙錠染色20分鐘。
6. 用凝膠成像儀觀察、拍照。
操作流程簡圖：
注：樣品可以采用新鮮樣品，硅膠干燥樣品，標本等
DNA提取可采用CTAB或SDS法
DNA質量檢測可用紫外分光光度計法和電泳法