RAPD技術

實驗概要

RAPD(Random  Amplified Polymorphic  DNA,隨機擴增的多態性DNA)是建立于PCR實驗基礎上的檢測基因組DNA多態性的實驗技術。從1990年Williams首次應用該技術到今，短短幾年間，該技術由于具有快速、簡便、耗資相對較少，所需設備較少的特點，因此發展極快，目前已在農、林、牧、醫等領域得到了廣泛的應用。

該技術利用大量的、各不相同的、堿基順序隨機排列的寡聚單核苷酸鏈為引物，以待研究的基因組DNA片段為模板，進行PCR擴增。擴增產物通過瓊脂糖凝膠電泳等分離，經染色后，即可對此基因組DNA進行多態性分析。本實驗即擬通過以一種隨機片段為引物進行PCR擴增，以便了解和掌握最基本的RAPD操作技術。

主要試劑

10mer隨機引物、Taq酶、dNTP、10×緩沖液、無菌水、石臘油、電泳試劑

主要設備

PCR儀、離心機、取液器、電泳儀、電泳槽、 紫外觀測儀

實驗步驟

1. 基因組DNA提取(略)。

2. 取0.5mlEppondef管,加入

基因組模板DNA    20ng                  PCR擴增參數

10×PCR緩沖液       1ul                    94℃  變性  １５秒

10μM的dNTP         0.2ul                 36℃  褪火  ３０秒

10mer隨機引物      0.4ul                 72℃  延伸  ４５秒

Taq酶(5u/ul)           0.1ul                  46個循環，結束后，72℃延時４分鐘

加水至              10μl   混勻后離心

再加入10μl石臘油，離心后，進行PCR擴增。

3. 擴增產物與電泳上樣液混勻，1.5% Agrose膠電泳分析。