問：R&amD Systems的Quantikine試劑盒是否可用于組織勻漿（或其它未經檢驗的）樣本？
答：很遺憾，R&amD
Systems尚未采用組織勻漿作為樣本對Quantikine系列的試劑盒做效果驗證。如果要決定試劑盒是否可用于未經檢定的樣本，實驗者最好先做一個“摻入和回收預試驗”。簡單來說，實驗者將樣本分為兩份：一份中摻入一定量的試劑標準，然后做一稀釋系列（一般稀釋到1:16），再將摻入過的一份同未摻入的一份相比。采用以下的公式來計算回收率（%）：測試值（pg
/毫升）/ 期待值（pg /毫升）x 100% = %
回收率。一般來說，回收率在80-120%可認為是可接受的。但是，可接受范圍應由每一實驗室自行決定。這種方法可用于檢定未被R&amD
Systems檢定的任何樣本。我們還有更加詳細的“摻入和回收”的實驗步驟，可向我們的技術服務部索取。我們也可進一步查閱文獻看一看是否有其他試驗人員用我們的產品做過不同的樣本，或不同的屬種。
問：加入稀釋劑是否會將樣本進一步稀釋？
答：因為稀釋劑是加入到所有的孔中，標準和被測樣本都被同樣稀釋，所以樣本的濃度可從標準曲線讀出，而不需作稀釋調整。
問：我是否可將標準曲線的兩端延伸？
答：在任何情況下，我們都不支持超出確定范圍的實驗結果。在我們確定的測試范圍，我們保證實驗結果的可重復性。
問：為什么不將測試范圍延伸到所述的靈敏度？
答：靈敏度是統計中大于零的可測到的最低值。它是通過本底信號和試驗的可變性計算出來的。靈敏度是將20個零復制物的中值加兩個標準差從標準曲線換算成分析物的濃度。而最低標準是我們可以放心的、仍可與標準曲線成直線相關的最低點，因而是可定量的。
問：Quantikine試劑盒中的試劑是否可互換？
答：如果試劑盒(RD1-, RD5-, RD6-)中的稀釋劑有相同的組件號和批量號，它們可以互換。R&amD Systems做“整個試劑盒的質量控制”，就是說，我們不支持不同批號之間的替代。在任何情況下，微孔板和共軛物都不可互換。
問：Quantikine試劑盒中的洗液是否可互換？
答：如果組件號相同，洗液在相同類型的試劑盒之間（普通試劑盒之間，或高靈敏度試劑盒之間）是可以互換的。但是，普通Quantikine試劑盒中的洗液不能用于高靈敏度的試劑盒，在普通Quantikine試劑盒中的洗液含有磷酸，會干擾高靈敏度Quantikine試劑盒中由NADPH驅動的信號擴增。
問：在某些實驗中為什么必須使用聚丙烯（polypropylene）的試管做標準稀釋？
答：有些細胞分子會粘到玻璃或聚苯乙烯（polystyrene），但不粘聚丙烯。
問：在Quantkine試劑盒中沒有足夠的RD5校正物來稀釋我的細胞上清液，我該怎么辦？
答：你可用細胞培養液來做起始的稀釋，直接移液到微孔板的最終的1:10稀釋可使用校正物來稀釋。
問：我的Quantikine試劑盒中的RD1測試稀釋劑看上去有沉淀物，可以用嗎？
答：有些RD1測試稀釋劑的確有不同程度的沉淀物。在這種情況下，我們在實驗步驟手冊中已做紀錄。
問：標準曲線為什么要采用4-pl擬合？
答：R&amD Systems在研發和質控我們絕大多數的Quantikine
ELISA試劑盒時，采用4-相參數的曲線擬合（又名為4-pl或sigmoidal曲線擬合）。一般來說，它比log-log和直線有更好的曲線擬合。如果數據分析不可用4-pl的話，log-log是下一個最好的選擇。
問：試驗步驟中說要用500 rpm，我的搖床達不到。這個速度是正確的嗎？
答：500 rpm使用的是0.12英寸的震蕩軌道。如果你的震蕩器用更大的震蕩軌道，500
rpm的確是過快了。在這種情況下，你應根據R&amD
Systems的建議重新調整震蕩速度。你可拿一個多余的96孔微孔板，加入洗液，洗液的量與實驗時孔中的溶液量一致；封板后，調整震蕩器的速度，直到液體在孔的上部劇烈旋轉但不濺到封膜上或產生泡沫為止。
問：我有太大變異系數（CV）的問題，是怎么回事？
答：最大但不是唯一的兩個原因，可能是移液誤差和清洗方式。你可參照我們的《如何成功地操作ELISA指導》，網址：http://www.rndsystems.com/tsg_detail_objectname_elisa.ax
問：Quantikine ELISA試劑為什么需要做稀釋？
答：主要有兩個原因：一，在絕大多數的樣本中細胞因子的含量非常高，如不經稀釋，讀數將高于標準曲線；二，也是最普遍的原因我們建議做稀釋，是將樣本中的干擾或基質效應稀釋掉。
問：我是否可以在任何過夜步驟停止Quantikine試驗、延長溫育時間、或提高溫育的溫度？
答：R&amD System不建議對任何Quantikine
ELISA延長溫育時間。而且，當實驗步驟改變了，我們無法保證Quantikine ELISA的實驗結果。R&amD
System做“整個試劑盒的質量控制”，就是說我們無法支持改變過的實驗步驟，因為它們未經質量控制。延長溫育時間、或提高溫育溫度以縮短溫育時間會提高實驗的本底（又名空白或零標準）。這樣一來，樣本和標準中的低量細胞因子會測不到，因為增高了的本底信號將從所有孔中的數值中差減。
問：我用了DuoSet ELISA開發系統，但幾乎就沒有顏色產生。那些步驟可能出了問題？
答：很多方面都會影響到顏色的產生。比如：
1) A的干擾。選擇不含脂肪酸的ELISA級別的A很重要，可以降低球蛋白對實驗的干擾。R&amD Systems建議使用Serological Protei的A（目錄#82-045）。
2) 非室溫下的試劑在使用時會抑制信號；如果室溫過低，信號也會被抑制。
3) 如果使用了未表明為“高結合性ELISA”的微孔板，捕獲抗體同微孔板的結合就不牢固，從而導致測試的顏色產生過低。
4) 任何試劑，如果配制出錯、儲藏不當、或已過期，都將出現這一問題。
5) 讀板時使用的波長同低物的波長不一致。
問：我是否可以使用你們的抗體配對ELISA中的抗體，但用另一家公司的蛋白為標準？
答：若使用一家公司的抗體而用另一家公司的標準的帶來問題是它們會有不同的免疫活性（或不同的抗體與重組蛋白的結合力）。這種現象的出現是因為作為標準的重組蛋白同作為抗體免疫原的重組蛋白在蛋白序列或折疊中會有所不同，如果蛋白序列或折疊的不同發生在抗體結合部位，就會引起抗體對重組蛋白標準的不識別或識別很差。