ELIot
酶聯免疫斑點
問：什么是ELIot？
答：R&amD
Systems的ELIot測試采用了ELISA技術。先將對某一細胞因子專一的單克隆抗體固定于微孔板的PVDF膜上，再將經適當刺激誘導的細胞移液到微孔中，然后將整個微孔板放置在保濕的370CCO2培養箱中溫育特定的時間；在溫育的這段時間里，固定化的抗體與它們周圍分泌細胞析出的細胞分子結合；洗掉細胞和未結合的分子，加入對這一細胞因子有特異性的生物素化的多克隆抗體；清除未結合生物素化的抗體，加入經streptavidin共軛的堿性磷酸酶；將未結合的酶從反應中洗除后，再加入底物溶液（BCIP/T）；一個藍黑色的沉淀（斑點）在細胞因子產生的位置形成，每一斑點代表了分泌特定細胞因子的細胞。這些斑點可用自動讀板系統（不同于普通讀光儀）讀出；或者，這些斑點也可用立體顯微鏡手控讀出。
問：ELIot與ELISA有何不同？
答：ELISA實驗測量的是樣本中某一細胞因子的總量（一般表示為pg或ng /mL）；ELIot實驗并不測定樣本中某一細胞因子的量，而是測定有多少細胞在分泌某一細胞因子。
問：ELIot與組件有何不同？
答：R&amD
Systems的ELIot試劑盒含有：對某一細胞因子有特異性的單克隆抗體（這一抗體已預先固定在微孔板的PVDF膜上）、生物素化的檢測抗體，Streptavidin共軛的堿性磷酸酶、BCIP/T產色物、和重組細胞因子陽性對照。試劑盒備有試驗所需所有的用品，試驗者不需再進行優化。
R&amD
Systems的ELIot開發試劑分為兩個必需組分，必須分別購買對細胞因子具有特異性的開發組件和ELIot藍色組件。對細胞因子專一的開發組件包括對細胞因子特異的捕獲抗體和檢測抗體；ELIot藍色組件（目錄#SE002）對所有R&amD
Systems的對細胞因子特異的開發組件都適用，它包含Streptavidin-堿性磷酸酶和BCIP/T產色物。
問：我是否可只使用ELIot試劑盒中的部分微孔板？
答：因為帶有PVDF膜的微孔板很靈敏，我們不能將微孔板做成條狀的形式。如溫育多次，我們將不能保證使用微孔板所得的實驗結果；因為微孔板不再無菌，所以未使用的微孔可能有污染。我們并不擔心第一次使用時污染會有，因為大多數的細胞培養液都含抗菌素，而溫育時間又相對較短。我們選擇帶有的PVDF微孔板是因為它能比標準ELISA級別的聚丙乙烯(polystyrene)微孔板提供更好的實驗結果。
問：我需要用多少細胞？
答：這個問題比較難回答，根據實驗要求而異。使用多少細胞有許多變量：比如細胞的大小、細胞的類型、分泌細胞因子的細胞的多少、誘導細胞的方法等。剛開始時，需要做一些細胞的稀釋（如，將每孔10,000,000個細胞稀釋到100,000甚至到10,000個細胞）來決定可形成明顯斑點的最佳細胞數。例如，如果微孔中的細胞已達到單層融合狀而大部分細胞分泌待測的細胞因子，形成的斑點就很難分開，這樣就很難定量檢測到分泌所測的細胞因子的細胞數；在這種情況下，應做一系列稀釋(titration)，降低細胞數。如果在同樣的單層融合狀細胞中只有少數細胞分泌待測的細胞因子，形成的斑點就會很明顯，就很容易被定量測定；在第這種情況下，細胞數目就是合適的。所以，必須針對不同細胞類型和誘導方法來確定每孔中應加入細胞的最佳數目。
問：在一個微孔板上可做多少個樣本？
答：這是基于96孔微孔板的測試。除去陽性對照、陰性對照、本底（空白）和檢測抗體對照外，還剩下88孔，可做44個樣本（每個樣本做雙份）。
一般常見問題
問：蛋白和抗體的期限？
答：R&amD
Systems有一政策就是不給我們的蛋白和抗體產品提供生產日期或產品期限，從而限制產品的使用期限。在適當的儲存條件下，蛋白和抗體趨于穩定多年。這些儲存條件包括以干粉形式儲存蛋白、或在蛋白濃度高于0.1毫克/毫升時冷凍（-20°C或-80°C）儲存蛋白并減少冷凍/解凍的次數。請參照每一產品插頁中的指示。我們公司常規的質量控制保證每一產品在售出時都具有生物活性。在實驗者收到產品后，我們無法控制產品的儲存狀況。我們愿以產品保證書來替代產品期限。在正常實驗條件下，我們保證R&amD
Systems的所有的產品將達到或超過我們公布的標準。
問：X產品是否可用于X用途但未列入資料單？
答：如果某一特定用途未列入我們的資料單，R&amD Systems內部沒有更多的數據。我們的技術服務可以查閱我們的文獻庫，看一看是否有其他實驗人員發表過這一產品的這類用途、樣本類型、和/或種屬。
問：列在你們網站上的產品帶有/CF，是什么意思？
答：CF代表無攜帶物。一般來說，每1 mg的細胞因子都加有50
mg的A（攜帶蛋白）以穩定細胞因子。無攜帶物的形式不含任何A。通常來說，帶有A的細胞因子比不帶攜帶物的細胞因子可在更低的濃度保存、有更長的貨架壽命。如果細胞因子是用于加入細胞/組織培養或作為ELISA的標準，可采用帶有A的細胞分子。當細胞因子是用于原位應用、標記細胞因子、或A會產生干擾的實驗時，應采用無攜帶物的細胞因子。
問：rhEPO是以單位列出的，如何換算成質量?
答：R&amD Systems的重組人EPO（超純）目錄#286-EP-250，和我們的重組人EPO（組織培養級）目錄#287-TC-500，都有同樣的單位對質量的轉換。一單位的rhEPO大約是10 ng。
問：R&amD Systems是用什么級別的A來重新配制細胞因子溶液的？
答：R&amD Systems采用Serological Protei的餾分V A（目錄#81-068）來重新配制蛋白溶液。Serological Protei的電話是(815)937-8270。
問：為什么一些R&amD Systems的重組蛋白有Fc融合？
答：Fc可以穩定分子。R&amD Systems利用Fc部分有趨于成雙聚體的傾向，創建有生物活性的雙聚體分子。以受體/
Fc嵌合體為例，與其可溶性受體相比，這種融合體輔助我們創建了可與它的配位體產生更高親和力性的受體。R&amD
Systems提供同樣的Fc部分作為對照。目錄是：110-HG，人的重組IgG/Fc。
問：R&amD Systems的一些產品為什么需用酸性溶劑來重新配制？
答：采用酸性溶劑來重新配制某些細胞因子是非常關鍵的。因為有些細胞因子的等電子點很高，它們有極高的疏水性。如不使用這種酸性重配劑，
這些細胞因子就很難全部溶于溶液中。因為同樣原因，我們還建議用同樣的酸性重配劑來儲存這些細胞因子的分裝樣。這些重配劑的pH值通常在4.5-5。
這些已處于溶液狀態的蛋白分裝樣可用細胞培養液（或其它合適的緩沖液）進一步稀釋到工作濃度。這樣一來，溶劑中少量的酸可被緩沖掉，可安全用于活細胞。
問：為什么要將某一細胞因子用/A重新配制如果它是從同樣的溶液中干粉化的？
答：在重配劑中額外的A可以幫助細胞因子的回收、同時也增加穩定性。R&amD
Systems用于干粉化溶液中的A的體積是極微的，所以用的/A重配劑并不會得到2X鹽濃度。如果未按照資料單所述方式來重新配制，R&amD
Systems將不能保證產品的結果，因為我們就是這樣來質量控制我們產品的。
問：如何將千道爾頓（kDa）轉換成克/摩爾？
答：R&amD Systems將我們蛋白的分子量以千道爾頓（kDa）列在資料單上。大概換算率是：1道爾頓=1克/摩爾（即一個8千道爾頓的蛋白相當于8,000克/摩爾）。
問：如何將你們的產品換算成國際單位？
答：對細胞因子而言，業內尚無統一標準的單位。為避免混亂，R&amD
Systems有意識地將我們的蛋白以質量為單位。普遍接受的定義是：一單位等同于某一實驗的ED50值。很顯然，不同條件下的ED50值會有所不同。如果遵循某一實驗結果的單位，或以單位來比較不同供應商的產品，必須首先確定產品來源的這一單位是如何定義的。當第一次用一批新產品或新來源時，R&amD
Systems強烈建議實驗者先用樣本做一系列稀釋，建議以我們ED50范圍的中點作為稀釋的中點，上下各增加和減少5, 10,
20，甚至50倍。如果試驗人員或產品的來源用他們的“單位”同WHO的標準單位相比，我們在目錄中和網站上都列有“WHO轉換表”(http://www.rndsystems.com/a/g_sitebuilder.a?bodyId=235），實驗者可查詢以便決定實驗的設置。
問：為了有生物活性，這個蛋白要求我用一個交聯結合的抗體-- MAB050。這是一個什么抗體？我一定要這么做嗎？
答：這個抗體是針對6x組蛋白疊序的，我們建議使用的帶有交聯結合體的蛋白含有6x組蛋白標簽。R&amD
Systems用這個抗體來交聯結合組蛋白標簽，使得帶有組蛋白標簽的蛋白具有更高的生物活性。R&amD
Systems質控檢驗這些經過抗體交聯結合的蛋白，保證它們的ED50與未經交聯結合的蛋白的ED50相符。所以，如不采用交聯結合抗體，不同批號之間的蛋白將有非常顯著的不同的ED50。