由于miRNA被發現在癌癥機理中起重要的作用,尤其是與腫瘤轉移相關聯,因此對于miRNA的研究來說,最讓人興奮的是有希望應有于癌癥治療中的RNA 抑制療法或模擬miRNA表達療法,尤其是對于出現腫瘤轉移的癌癥病人的治療。
但是miRNA具有成百上千個靶標,所以要完全理解一個miRNA和靶標的特異性反應與腫瘤發生之間的聯系,是一項非常具有挑戰性的工作,尤其是在癌癥研究中鑒別出miRNA的準確靶點仍然是一大難題。現已知道miRNA的調節功能是通過結合不同的蛋白質或RNA來實現的,因此研究miRNA與蛋白的結合情況對于揭示miRNA的功能及指導RNA療法的研發具有重要意義。
Robert Nakamura博士是Advanced Genetic Systems公司的首席執行官,作為驗證RNA-蛋白復合物作為治療靶點有效性的專家,他認為“我們知道RNA結合蛋白在不同的生理狀態下會結合不同的RNA。通過從細胞中分離完整的RNA-蛋白復合物,我們可以確認分子間的特異性相互作用,從而有希望為治療疾病找到破壞這些相互作用的方法。”
RIP技術(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RNA結合蛋白免疫沉淀),是研究細胞內RNA與蛋白結合情況的技術,是了解轉錄后調控網絡動態過程的有力工具,能幫助我們發現miRNA的調節靶點。
RIP這種新興的技術運用針對目標蛋白的抗體把相應的RNA-蛋白復合物沉淀下來,然后經過分離純化就可以對結合在復合物上的RNA進行分析。RIP可以看成是普遍使用的染色質免疫沉淀ChIP技術的類似應用,但由于研究對象是RNA-蛋白復合物而不是DNA-蛋白復合物,RIP實驗的優化條件與ChIP實驗不太相同(如復合物不需要固定,RIP反應體系中的試劑和抗體絕對不能含有RNA酶,抗體需經RIP實驗驗證等等)。RIP技術下游結合microarray技術被稱為RIP-Chip,幫助我們更高通量地了解癌癥以及其它疾病整體水平的RNA變化。