RNAi表達載體構建

近年來的研究表明，一些短片斷的雙鏈RNA可以通過促使特定基因的mRNA降解來高效、特異的阻斷體內特定基因表達，誘使細胞表現出特定基因缺失的表型， 稱為RNA干擾（RNA interference，RNAi）。siRNA（small interfering RNAs）就是這種短片斷雙鏈RNA分子，能夠以序列同源互補的mRNA為靶目標，降解特定的mRNA。RNAi的發現具有劃時代的意義，它不僅深入揭示 了細胞內基因沉默的機制，而且它還是后基因組時代基因功能分析的有力工具，極大地促進了人類揭示生命奧秘的進程。現在越來越多的研究人員開始采用RNAi 來研究生物體的基因表達。RNAi技術可廣泛應用到包括功能基因組學，藥物靶點篩選，細胞信號傳導通路分析，疾病治療等等。

目前為止較為常用的5種制備siRNAs的方法包括

·         化學合成 

·         體外轉錄 

·         長片斷dsRNAs經RNase III 類降解 (e.g. Dicer, E. coli, RNase III)

·         siRNA表達載體或者病毒載體在細胞中表達siRNAs

·         PCR制備的siRNA表達框在細胞中表達

五種方法優缺點比較如下：