RTPCR內參基因選擇：除了βactin還能用什么？

• Q1： 要做real-time pcr，而該種的β-actin未確定，我知道一般用持家基因作內參，但似乎其他基因各有缺點，有的作者用他們做內參時被SCI雜志要求用兩個內參以證實，我想知道的是除了β-actin，哪個基因是SCI公認的內參基因(不用作兩個內參了)?

A1： 28S和18S rRNA

甘油醛-3-磷酸脫氫酶

還有α-tublin,ubiquitin,GAPDH,histone

Q2： 做相對定量real-time PCR時，本人不懂操作，將β-actin內參設置成target了，現在跑完了，有擴增曲線圖，和融解曲線，但沒法導出Ct值(SDS 1.4版本的軟件)， 請教大蝦們有沒有補救辦法，還是只能重新跑了?

黑色的就是我的beta-actin內參

A2： 重新設置一下不行嗎，熒光信號已經收集了。不用重跑。

Q3： 最近在做RT-PCR，但始終摸不清β- actin的意義。哪位可以詳細介紹一下β- actin作為內參照的意義?它與目的核酸片段的對比能說明什么問題?謝謝。

A3：
1. 內參即是內部參照(Internal Control)，對于哺乳動物細胞表達來說一般是指持家基因(Housekeeping Genes)，它們在各組織和細胞中的表達相對恒定，在檢測蛋白的表達水平變化時常用它來做參照物。

2. RT-PCR比較不同條件下或者不同組織中，目的基因表達量的相對多少，前提條件是等量的細胞上樣，才有比較的基礎。特別表達量不高時，上樣量的差別就很可能影響結果的分析。所以你需要內參。實驗時使用內參，即可簡便地對定量和上樣步驟產生的誤差進行校正。

3. beta-actin(細胞骨架蛋白)就是這樣一種管家基因，它是細胞骨架微絲的基本構成單位，在各種細胞中表達一般恒定而較少變化，所以常用作RT-PCR等的內參。比較各組目的產物與其內參的比值就是相對定量啊。

real-time PCR實驗中要求有內參作為參照，內參基因通常選擇持家基因，如β- actin是較常用的內參基因，因為它在各種細胞中的表達量一般是比較恒定不變的，因此是作為內參基因的首選