二、實驗器具的處理與準備
1、塑料制品：（包括槍頭、EP管、勻漿管等）
先將DEPC水從容量瓶中倒入瓷缸中，將塑料制品逐個浸泡其中，其中小槍頭需要吸管打入DEPC水，過夜，然后高壓，再烤干備用，實驗前將槍頭等放入吸頭臺，再高壓一次（EP管）
2、玻璃制品：泡酸過夜，沖洗干凈，蒙錫紙烤干備用（DEPC水泡）（洗凈后先泡1‰DEPC過夜，再烤干）
3、勻漿器：（包括剪刀、鑷子）先洗凈后，再高壓（不需要泡DEPC）
三、試劑配制：
1、DEPC水：吸出1ml放在1000ml雙蒸水中配成1‰DEPC水，放在1000ml容量瓶中靜置4小時備用。
2、75%乙醇：用無水乙醇 DEPC水配，然后放-20℃保存（其中DEPC水需先高壓）
3、異丙醇：放入棕色瓶中
4、氯仿：放入棕色瓶中
5、瓊脂糖
四、幾種緩沖液的配制：
1、電泳緩沖液：
Tris 54g
硼酸 27.5g
0.5M EDTA 20ml？ pH8.0
蒸溜水 1000ml
5×TBE （貯存液）
再將5×TBE稀釋10倍成0.5TBE就可以在電泳時使用（即工作液濃度），如取50ml貯存液 450ml水--→500ml工作緩沖液
2、上樣緩沖液：
0.25%溴酚藍
0.25%二甲苯青FF
30%甘油
6×緩沖液，4℃保存
五、瓊脂糖凝膠的配制：
1、1.0%：
1.0g瓊脂糖 100ml電泳緩沖液，微波爐中火30秒至沸騰，熔化的瓊脂物冷卻至60℃時加入10mg/ml溴化乙錠2.5μl，充分混勻，將溫熱的凝膠倒入已置好梳子的膠膜中，在室溫下放置30-45min后現進行電泳。
2、1.5%:
同上，將瓊脂糖的量改為1.5g
六、需購置的RT-PCR材料：
（生工. Tel. 2236106.）
Taq酶（含MgCl2 Buffer） 200u 70.00
dNTP: 1支
Oligo(dT)15: 1 OD 40.00 promega
M-MLV: 1支 250.00 promega (Buffer)
RNasin: 1支 110
-- -20℃
DEPC 5g 110.00
Trizol 100ml/1瓶 Invitrogen Life technologies
-- 4℃
Marker: 10μg 0.2μg/ml 150.00 科威
（1543. 994. 697. 515. 377. 231）
七、引物合成
正義：5′-CACGATGGAGGGGCCGGACTCATC-3′
反義：5′-TAAAGACCTCTATGCCAACACAGT-3′
2、par-4:
正義：5′-GGGACCTCGGAACTCAAC-3′
反義：5′-TGTATCTGCCTGGGACTG-3′
3、退火溫度計算
2（A T） 4（G C）
正反義平均數，再上下波動度（±4℃，或±5℃）
4、引物各合成5 OD，每OD一瓶分裝好
5、引物稀釋：
加DEPC水量為（μl）
= ? nmol / OD × 管上所標OD數×100
是為10p mol / μl 濃度的引物溶液