材料：
（1）急性期病人血清、鼠肺、鼠血或分離的漢坦病毒
（2）引物：
引物 | 序列（5’～3’） | 位置 | 片段（bp） |
逆轉錄引物 | TAGTAGTAGACTCC | 1~14 | LMS |
通用外引物 | AAAGTAGGTGITAYATCYTIACAATGTGG | 1910~1939 | M(+) |
GTACAICCTGTRCCIACCCC | 2373~2354 | M(-) | |
型特異性引物 | |||
漢灘病毒 | GAATCGATACTGTGGGCTGCAAGTGC | 1958~1984 | M(+) |
GGATTAGAACCCCAGCTCGTCTC | 2318~2340 | M(－) | |
漢城病毒 | GTGGACTCTTCTTCTCATTATT | 1936~1957 | M(+) |
TGGGCAATCTGGGGGGTTGCATG | 2331~2353 | M(－) | |
S片段引物 | ATGTTGCCTGGGGIAAAGAGG | 1200~1220 | S(+) |
GCGCACTAGTAGTAGTAGACTCCCTAAAGA | 1670~1696 | S(-) |
方法：
1）病毒RNA的提取：采用TRIzol按說明提取，制備模板RNA；
（2）逆轉錄、合成cDNA：采用 SuperScripTMII或AMV逆轉錄酶，按說明書進行；
（3）PCR擴增：反應條件為95℃預變性10分鐘，94℃60秒、55℃60 秒、72℃45秒、擴增30～35個循環，72℃延伸12分鐘。
（4）擴增產物用1～2％瓊脂糖凝膠電泳鑒定。若條帶的分子量與預期片段大小相同，則表明為特異性擴增產物。
必要時，可進行：
（5）PCR片段的回收和核苷酸序列測定：切下特異分子量條帶，用QIAquick凝膠回收試劑盒回收（按其說明書進行），自動測序儀測序。
意義：擴增到特異性條帶可確診漢坦病毒并明確其型別，序列測定還可以對漢坦病毒的變異情況進行研究。