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  • 發布時間:2019-11-03 18:12 原文鏈接: RTPCR步驟

    總RNA提取

    1. 取200mg組織,放到1.5ml EP管中,加入1ml Trizol剪碎。

    2. 震蕩30s。

    3. 加0.2ml氯仿,劇烈搖動30s,室溫3min。

    4. 12000×g,4℃ 離心,15min。

    5. 吸上層無色水相,移入另一EP管中(約0.5ml)。

    6. 加等體積異丙醇,-20℃,30min。

    7. 12000×g,4℃ 離心,10min。在管底部可見微量RNA沉淀

    8. 棄上清,加75%乙醇1ml,振蕩。

    9. 7500×g,4℃ 離心,10min。

    10. 棄上清,用濾紙小心吸取殘留液體,室溫干燥5-10min。

    11. 沉淀溶于20μl DEPC水,取1μl加入79μl DEPC水測OD260/OD280

    12. 計算濃度與純度,-70℃保存。

    逆轉錄合成 cDNA

    反應體系如下

    混勻快速離心一次

    反應條件如下

    -20℃ 冰箱凍存

    PCR反應

    混勻快速離心一次

    PCR產物-20℃冰箱保存

    取PCR產物8μl 加5×Loading Buffer 2μl 2%瓊脂糖凝膠電泳120V

    100mA 30min 溴化乙錠染色,凝膠成象儀成象并保存結


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