SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定蛋白質的分子量（垂直...2

三、器材與試劑：
1．器材：
①夾心式垂直板電泳槽，凝膠模（135×100×1.5mm）（北京六一儀器廠）
②直流穩壓電源（電壓300—600V，電流50—100mA）
③吸量管（1,5,10 ml） ④燒杯（25,50,100 ml）
⑤ 細長頭的滴管 ⑥1ml注射器及6號長針頭
⑦微量注射器（10μl或 50μl） ⑧水泵或油泵
⑨真空干燥器 ⑩培養皿（直徑120mm）
2．試劑：
（1）標準蛋白質
目前國內外均有廠商生產低分子量及高分子量標準蛋白質成套試劑盒，用于 SDS-PAGE測定未知蛋白質分子量。
①高分子量標準蛋白試劑盒（Pharmacia公司產品，表中16-1）。

表16-1 5種標準蛋白質

同時按說明書要求處理
②低分子量標準蛋白試劑盒，中國科學院上海生物化學研究所東風生化試劑廠生產（表16-2）。
表16-2 5種標準蛋白質

每種蛋白含量為40μg。用時加入200μl樣品溶解，經處理后，上樣10μl（2μg）就能顯示出清晰的條帶。

③自己配制低分子量或高分子量標準蛋白質混合試劑。如買不到標準蛋白試劑盒時，可參考常用的標準蛋白質及其分子量表。從中選擇3—5種蛋白質，如馬心Mr35  000）、雞卵卵清蛋白（Mr43 000）、牛血清白蛋白（Mr67  000）等蛋白質，按照每種蛋白0.5—1mg·ml-1樣品溶解液配制。可配制成單一蛋白質標準液，也可配成混合蛋白質標準液。
（2）連續體系SDS- PAGE有關試劑
①0.2mol·L-1pH7.2磷酸鹽緩沖液：稱取磷酸氫二鈉(AR)Na₂HPO₄·2H₂O25.63g 或Na₂HPO₄·12H₂O51.58g，再稱取磷酸二氫鈉(AR)NaH₂PO₄·H₂O7.73g 或NaH₂PO₄·2H₂O8.74g，溶于重蒸水中并定容到1000ml。
② 樣品溶解液：0.01mol·L-1pH7.2磷酸鹽緩沖液，內含1%SDS、1%巰基乙醇、10%甘油或40%蔗糖及0.02%溴酚藍。用來溶解標準蛋白質及待測固體蛋白質樣品。配制方法如表16-3。

表16-3連續體系樣品溶解液配制

如樣品為液體，則應用濃一倍的樣品溶解液，然后等體積混合。
③凝膠貯液：稱Acr 30g,Bis 0.8g，加重蒸水至100ml，過濾后置棕色瓶，4℃貯存可用1—2個月。
④凝膠緩沖液：稱SDS 0.2g，加0.2mol·L^-1 pH7.2磷酸鹽緩沖液至100ml。4℃貯存，用前，稍加溫使SDS溶解。