SDSPAGE凝膠制實驗及其各實驗試劑的配制方法

SDS-PAGE凝膠制備屬于實驗室最常規的操作了，剛開始做蛋白實驗總是在找凝膠配制實驗中所用試劑的配方，這里總結了分離膠、濃縮膠、分離膠和濃縮膠緩沖液、考馬斯亮藍染液、樣品緩沖液、電泳緩沖液等配方。
1.
分離膠(12%)
配制

所需試劑

所需體積

分離膠(12％)

30％丙烯酰胺

6.0
ml

1.5
mol/l
Tris-HCl

3.8
ml

10%SDS

150
μl

10%過硫酸銨

150
μl

TEMED

6
μl

蒸餾水

4.9
ml

2.
濃縮膠(5%)
配制

所需試劑

所需體積

濃縮膠(5％)

30％丙烯酰胺

1.3
ml

1.5
mol/l
Tris-HCl

1.0
ml

10%SDS

80
μl

10%過硫酸銨

80
μl

TEMED

8
μl

蒸餾水

5.5
ml

3.
分離膠緩沖液(pH8.9)
配制

所需試劑

所需體積

分離膠緩沖液

Tris

36.6
g

1
mol/l
HCl

48
ml

蒸餾水

補足至100
ml

4.
濃縮膠緩沖液(pH6.7)
配制

所需試劑

所需體積

濃縮膠緩沖液（pH6.7）

Tris

5.98
g

1
mol/l
HCl

48
ml

蒸餾水

補足至100
ml

5.
30%丙烯酰胺(pH≤7.0)
配制

所需試劑

所需體積

30%丙烯酰胺（pH≤7.0）

丙烯酰胺

29
g

甲叉-雙丙烯酰胺

1
g

蒸餾水

補足至100
ml

6.
10%過硫酸銨(W/V)：1g過硫酸銨溶于10ml水中，4℃保存數周，盡量現用現配。
7.
10%SDS：將10
g
SDS溶于80ml重蒸水中并輕緩攪拌(室溫低時需水浴加熱溶解)，再定容至100ml，室溫存放。
8.
樣品緩沖液
配制

所需試劑

所需體積

樣品緩沖液

1
M
Tris-HCl（pH6.7）

5
ml

SDS

2.5
g

巰基乙醇

1
ml

溴酚蘭

0.05
g

蔗糖

10
g

蒸餾水

補足至100ml

9.
考馬斯亮藍染色液：0.25g考馬斯亮藍R-250用少量甲醇溶解后，用甲醇(40ml)-乙酸(10ml)水溶液稀釋至100ml。
10.
Tris-甘氨酸電泳緩沖液(pH8.3)
配制

所需試劑

所需體積

Tris-甘氨酸
電泳緩沖液（pH8.3）

Tris堿

15.1
g

甘氨酸

94
g

10％（W/V）SDS

50
ml

去離子水

補足至100
ml

凝膠配制所需試劑的母液不能放置太久，有條件的實驗室可將母液保存在4度冰箱中，放置母液被微生物污染或者出現沉淀。