SMRT測序：評估基因編輯效果的新利器

　　新興的CRISPR技術在短短一年多的時間內，掀起了基因組編輯的熱潮。然而，對這些基因改造手段的效率和結果，我們仍難以評估。目前的一些工具，如熒光報告基因、克隆分析，缺乏生成報告細胞系時所需的靈敏度。高通量測序方法雖能科服這一問題，但無奈讀長太短，而供體DNA模板往往很長。

　　目前，還沒有一種測序平臺能同時評估非同源性末端接合(NHEJ)和同源介導修復(HDR)的發生頻率，而這正是雙鏈DNA斷裂的兩種主要修復機制。近日，單分子測序帶來了一個好消息，研究人員證實，單分子實時(SMRT)測序技術能夠同時測定任何位點的基因組編輯結果。這項研究成果發表在3月27日的Cell Reports上。

　　研究由來自斯坦福大學的Matthew Porteus領導。研究人員在文中指出，這種方法可應用于各種基因組編輯平臺，包括TALEN、CRISPR/Cas9和鋅指核酸酶(ZFN)，以確定理想的改造結果出現時的條件和策略。

　　靶向基因組編輯，讓研究人員能夠在基因組中幾乎任何位點，引入精確的序列修飾。然而，研究人員指出，這些基因組修飾策略并不總是帶來理想結果。“精確的基因組修飾……取決于斷裂是由NHEJ修復的，還是有HDR修復的。如果斷裂由NHEJ修復，在斷裂位點可能會引入小的插入或缺失。不過，若由HDR修復，就能引入理想的序列變化，形成特定修飾。”