SPA各種免疫檢測試劑制備實驗——SPA純品

SPA 純品系由含 A 蛋白的 Cowan I 株金黃色葡萄球菌中純化獲得。其制備過程除細菌培養外，主要有提取和純化這兩個工藝組成。提取方法多種，其中溶葡萄球菌素與親和色譜組合方法最有效。現介紹如下。

菌苔

Tris · HCl碳酸氫銨溶葡萄球菌素飽和硫酸銨

DEAE-Sephadex A50IgG-Sepharose 4B 親和層析柱

1. 用 0.05 mol/L（pH 7.5）的 Tris · HCl 洗下菌苔，每 100 g 濕菌加溶葡萄球菌素 5 mg，調節 pH 值到 3.5，離心后取上清，并將 pH 值調到 7.0。

2. 用飽和硫酸銨沉淀，溶解透析，透析物用 DEAE-Sephadex A50 純化，以 0.1 mol/L 碳酸氫銨（NH₄HCO₃）平衡后上樣，再平衡過夜。

3. 用 0.4 mol/L NH₄HCO₃ 洗脫（流速 1.5 ml/min），樣品測定 A₂₇₅ nm 和活性，將含活件者合并、濃縮、凍干保存于 -40℃ 中。

4. 上述純化獲得的 SPA 可進一步用 IgG-Sepharose 4B 親和層析柱過濾，進一步純化 SPA。

5. 純度鑒定用 7.5％ 聚丙烯酰胺凝膠為分離系統進行聚丙烯酰胺凝膠電泳，樣品濃度為 1 mg/ml，加樣量為 40 μl。電泳結果應顯示一條明顯條帶。