SPE柱助力著色劑檢測

本文應用Cleanert PWAX、Cleanert PA和Venusil XBP C18液相色譜柱對食品中的人工合成著色劑進行檢測，該方法快速、準確，且適用于大批量樣品的同時檢測。

人工合成著色劑又稱人工合成色素，常以苯、甲苯等為原料。《食品中合成著色劑的測定》（GB/T 5009.35-2003），采用聚酰胺吸附食品中的人工合成著色劑，用乙醇胺溶液洗脫。聚酰胺對合成色素的吸附能力會受到溫度的影響，實驗時需對樣品和淋洗液做加熱處理，而乙醇胺濃縮所需時間過長，不適合大批量樣品的同時處理，且不易做自動化方法移植。

大多數人工合成著色劑均具有苯磺酸鈉結構，本實驗選用天津博納艾杰爾科技公司的Cleanert PWAX弱陰離子型固相萃取小柱和Cleanert PA聚酰胺小柱，用以吸附食品中的合成著色劑，選用氨化甲醇洗脫，濃縮時間短，適用于大批量樣品的同時檢測。

實驗方法

實驗用品

乙酸；甲醇；乙酸銨溶液（0.02mol/L）：稱取1.54g乙酸銨，加水溶解并稀釋至1000ml；甲醇/甲酸（6+4）溶液：量取甲醇60ml，甲酸40ml，混勻；檸檬酸溶液：稱取20g檸檬酸，加水至100ml溶解，混勻；無水乙醇-氨水溶液-水：量取無水乙醇70ml，氨水溶液20ml、水10ml，混勻；水（pH=6.0）：水加檸檬酸溶液調節pH=6.0；水（pH=4.0）：水加檸檬酸溶液調節pH=4.0；水：超純水；合成著色劑儲備液：每1.0 ml中含檸檬黃、新紅、莧菜紅、靛藍、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍各0.5 mg；合成著色劑使用液：上述合成著色劑儲備液逐級稀釋成每1.0 ml中含檸檬黃、新紅、莧菜紅、靛藍、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍各5μg的水溶液。液相色譜柱：Venusil XBP C18（5 μm，100 ?，4.6×150 mm）； SPE小柱：Cleanert PWAX（150 mg/6ml）、Cleanert PA（1 g/6 ml）；針式過濾器：Hydrophilic PTFE（0.45 μm，13 mm）。

樣品制備

提取

飲料類樣品：稱取10 g樣品放入100 ml燒杯中，含二氧化碳的樣品加熱去除二氧化碳；配制酒類：稱取10 g樣品放入100 ml小燒杯中，加熱去除乙醇；液體調味料：稱取10 g樣品放入100 ml小燒杯中，若試樣pH值偏高，用檸檬酸水溶液調節pH至6左右；肉制品：稱取已均質樣品2 g，裝入50 ml離心管中，加入20 ml石油醚，渦旋混合1 min，4 000 r/min離心5 min，棄去石油醚上清液。殘渣吹干，加入5 ml乙醇銨渦旋1 min，4 000 r/min離心5min，重復提取至提取液無色，合并上清液置于80水浴中濃縮至2 ml，水洗轉移至10 ml比色管中，用水定容（若試樣pH偏高，用檸檬酸水溶液調節pH至6左右）；

凈化

SPE小柱：Cleanert PWAX（150 mg/6 ml）、Cleanert PA（1 g/6 ml）；活化：6 ml甲醇，6 ml水（pH值為6~7）；上樣：提取液全上樣；淋洗：6 ml水（pH=4）、6 ml甲醇-甲酸（6:4）、6 ml水（pH值為6~7）；洗脫：2%氨化甲醇6 ml；濃縮：收集洗脫液于50℃氮氣吹干，用1 ml水定容，過0.45 μm水系濾膜過濾，待測。

實驗條件

色譜柱：Venusil XBP C18，5 μm；4.6×150 mm；流速：1.0ml/min；進樣量：20 μl；波長：254 nm；流動相及時間梯度如表1所示。

結果與討論

PWAX SPE小柱添加回收實驗

通過對不同基質樣品的加標實驗，對上述檢測方法進行驗證，結果如表2、3所示。

PA聚酰胺SPE小柱添加回收實驗

通過對不同基質樣品的加標實驗，對上述檢測方法進行驗證，結果如表4所示。

赤蘚紅凈化方法優化

赤蘚紅為苯甲酸鈉結構，相對其他苯磺酸鈉結構的著色劑，在SPE小柱上保留較弱，國標方法（GB5009.35-2003）中赤蘚紅的前處理方法是和其他色素不一樣的，采用的是液液萃取的方法。如按照上述凈化方法操作，在淋洗階段赤蘚紅將全部被洗脫下來。通過方法優化，最終淋洗方法確定為6 ml水（pH值6~7）、6 ml甲醇，選用Cleanert PWAX（150 mg/6 ml），其他條件不變，可滿足同時處理9種著色劑的實驗要求。

Cleanert PWAX和Cleanert PA對比

采用相同的前處理方法，方法無需調整；聚合物基底材料，極大的提高了產品的吸附容量；小規格產品即可取得與大規格聚酰胺相同的實驗效果，便于控制流速和自動化方法移植。

實驗中注意事項

若提取液呈堿性，在上樣之前要將其pH值調節至6左右，保證小柱可對合成著色劑有良好地吸附；若樣品酒精度過高，建議在上樣前對樣品進行除醇處理；SPE小柱凈化過程中，要注意對流速的控制，建議控制在1 ml/min左右；洗脫液氮吹復溶后，應選用水系濾膜過濾，防止因濾膜吸附造成樣品的損失，建議選用Agela Hydrophilic PTFE濾頭。

小結

實驗結果表明，Cleanert PWAX、Cleanert PA和Venusil XBP C18液相色譜柱可以用于食品中的合成著色劑的檢測，該方法快速、準確。Cleanert PWAX SPE小柱可同時處理9種著色劑，Cleanert PA可同時處理8種著色劑。