SPEHPLC測定飼料中5種磺胺類藥物

方案優勢

采用SPE-HPLC-UV 測定飼料中磺胺嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺喹惡啉5種磺胺類藥物的方法，簡單快速，準確。

采用標準

國家相關標準

方法/原理/步驟

　　1.樣品制備

　　飼料，打碎。

　　2.樣品提取

　　稱取混合飼料樣品2 g，置于具塞錐形瓶中，加入50 mL的乙腈于振蕩器振蕩提取30 min，過濾，濾液備用。

　　3.樣品SPE凈化

　　準確吸取試液混合飼料2 mL，移入用10 mL乙腈淋洗過的堿性氧化鋁小柱中，令其自然流速流出。待試液全部流出后吹干，用2次2 mL流動相洗脫，收集洗脫液，并過0.45μm的濾膜，濾液上HPLC測定。

儀器設備

　　儀器與試劑

　　儀器：四元低壓LabTech-HPLC；色譜柱：LabTechC18 4.6 mm×25 cm；LabTech旋轉蒸發儀；Win-12手動固相萃取儀。

　　試劑：冰乙酸，優先級；甲醇，色譜純；乙腈，色譜純；所用水均為超純水。

　　流動相：在1 000 mL容量瓶中加入750 mL去離子水，移取冰乙酸3 mL加入水中，與250 mL乙腈混合，搖勻，過0.45μm濾膜，脫氣，備用。

　　磺胺類藥物標準溶液濃度20μ/mL：磺胺嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺喹惡啉。

　　固相萃取柱：堿性氧化鋁固相萃取柱，500 mg/3 mL。

　　HPLC色譜條件

　　流動相：乙腈:水(25:75)；流速：1.0 mL/min；紫外檢測波長為270 nm；進樣量：20μL；柱溫：40℃。

結果與結論

　　磺胺類藥物的HPLC色譜圖

　　將5種磺胺類藥物混標進HPLC分析，磺胺嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺喹惡啉濃度均是4mg/mL。結果如圖所示：見圖1。

圖1 5種磺胺類藥物的HPLC色譜圖

　　重復性實驗

　　將5種磺胺類藥物混標進HPLC分析，磺胺嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺喹惡啉濃度均是2mg/mL，重復進樣，重疊色譜圖如下圖所示，并且計算出峰時間重復性RSD均小于5%，見表1。

　　1.磺胺嘧啶；2.磺胺間甲氧嘧啶；3.磺胺二甲基嘧啶；4磺胺甲惡唑；5.磺胺喹惡啉

　　圖2 5種標品的重疊色譜圖

　　表1 5種標品的重復性及RSD%

　　磺胺嘧啶　            4.558    4.557     4.540　4.553　4.553　0.158

　　磺胺間甲氧嘧啶　6.377　6.373　6.360　 6.377　6.377　0.116

　　磺胺二甲基嘧啶　7.597　7.590　7.573　 7.587　7.582　0.118

　　磺胺甲惡唑           10.453　10.440　10.408　10.433　10.420　0.167

　　磺胺喹惡啉　       16.950　16.935　16.895　16.917　16.893　0.147

　　飼料樣品的空白色譜圖和加標色譜圖

　　飼料空白樣品和加標樣品經過提取，并通過小柱凈化后，得到的色譜圖見圖3和圖4.。

　　圖3飼料樣品空白的色譜圖

　　1.磺胺嘧啶；2.磺胺間甲氧嘧啶；3.磺胺二甲基嘧啶；4磺胺甲惡唑；5.磺胺喹惡啉

　　圖4飼料樣品加標的色譜圖(1 mg/kg)

　　飼料樣品過SPE凈化的回收率及RSD

　　采用加標樣品(加標濃度磺胺嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶;磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺喹惡啉均為1 mg/mL)，經提取、SPE凈化處理，并用HPLC分析，計算加標回收率及相對標準偏差，5種磺胺類藥物的回收率均在82.65%~105.70%之間，RSD均小于10%(表2)。表2

        飼料樣品中加標過SPE5種磺胺類藥物的回收率及RSD(n = 5)

　　峰序　             保留時間(min)   SPE-1　  SPE-2　   SPE-3　  SPE-4　  SPE-5　 平均值　 RSD%

　　磺胺嘧啶　            4.558　       102.04　   94.62　   91.92　  85.79　   94.77　   93.83　   6.24

　　磺胺間甲氧嘧啶　6.377　        108.14　   99.90　 98.39　   91.99　  100.78　   99.84　    5.79

　　磺胺二甲基嘧啶　7.597　       108.46　   102.18　106.25　107.78　103.85　105.70　     2.51

　　磺胺甲惡唑　         10.453   　94.46　    83.06　   86.91　    76.719　   78.97　84.02     　8.35

　　磺胺喹惡啉　         16.950　    93.22   　85.57　   80.65　     76.54   　77.28　  82.65　    8.35

　　結論

　　本方法對飼料樣品提取，并采用手動的Win-12SPE凈化，采用HPLC檢測其中的5種磺胺類藥物，5種磺胺類藥物的回收率均在82.65%~105.70%之間，RSD均小于10%。實驗過程操作簡單，結果顯示數據理想，可用于常規的飼料中磺胺類藥物的檢測。