Southern雜交技術1

Southern技術是指以Southern名字命名的DNA轉移雜交技術。它可用于基因組特定DNA序列的定位，可以測定相關片段的同源性、可以從c庫、基因組文庫中篩選完整基因等。用一種或多種限制性內切酶對基因組DNA加以切割，通過瓊脂糖凝膠電泳分離酶切片段，隨后，使DNA在原位變性，并從凝膠轉移至固相膜，用已知核苷酸片段加以標記作為探針，通過分子雜交來檢測待測樣品中是否存在互補的核酸序列。該技術已成為分子生物學中一類重要的檢測手段。下面分別介紹利用光敏生物素試劑盒及DIG試劑盒進行雜交的方法。

十五－1:光敏生物素試劑盒雜交實驗

一儀器：分子雜交儀、搖床、 烤箱、取液器、電泳儀、電泳槽

二試劑：硫酸葡聚糖鈉鹽(可不用)、聚乙烯吡賂啉酮（PVP）、聚蔗糖、牛血清白蛋白（BSA）、100mM EDTA、3MnaAC、無水乙醇、電泳緩沖液、切變性鯡魚精DNA（100ug/ml）

20×SSC溶液 氯化鈉 ３Ｍ 預雜交液 ６×SSC

檸檬酸三鈉 0.3M （含100ug/ul變性鯡魚精DNA）

pH 7.0 ５×Denhardt's 溶液

0.5%SDS

變性液 0.5M NaOH 中和液 1M Tris-HCL pH 7.4

1.5M NaCL 1.5M NaCL

封閉液 3gBSA溶于70ml水中，濃鹽酸調pH至3.0,煮沸20分鐘后，冷至室溫，NaOH調pH至7.5,加入10ml以下緩沖液（1M Tris-HCL pH7.5, MgCL2 0.19%, NaCL 5.8%, Triton X-100 0.05ml）定容至100ml

５０×Denhardt's 溶液 1％PVP 1M PBS NaCL 0.8% pH 7.4

1%BSA KCL 0.02%

1%聚蔗糖 Na2HPO4 0.144%

KH2PO4 0.024%

洗滌液

Ａ:２×SSC,250ml中含0.1%SDSＢ：0.1×SSC,250ml中含0.1%SDS

Ｃ：Tris-HCL 100mM pH 7.5 Ｄ：Tris-HCL 100mM

NaCL 1M NaCL 0.5M

MgCL2 2mM Tween 20 0.5% pH 7.5

Triton X-100 0.05%

親和素－堿性磷酸酶溶液 Tris-HCL 100mM

NaCL 1M

MgCL2 2mM

Triton X-100 0.05%

pH 7.5

堿性磷酸酶2-3單位/ml

底物溶液 Tris-HCL 100mM pH 9.5 終止液

NaCL 100mM Tris-HCL 10mM

MgCL2 5mM EDTA 1mM