按先將水和DNA 按反應體系所需的量取至一1.5毫升離心管中，混勻，短暫離心至管底，放至100℃干浴中變性10 min，變性探針迅速置于冰浴上 5 min，按反應體系將反應混合液（dNTP，Random primer，Klenow ）加入變性DNA中，在同位素操作臺上，加入32P 標記的dNTP（a-32P dCTP*，放射性比活>3000Ci/mmol），30℃溫育3小時以上。
1.雜交
將標記好的探針，補加300μl雜交液，100℃變性（or 0.4N NaOH變性），加入雜交袋（盒）中（忌直接加于膜上）。雜交前作標記效率測定，>25%以上可以往下做雜交， 過夜雜交。雜交效率受雜交速率及雜交穩定性影響。
2.洗膜：從低嚴謹度到高嚴謹度冼膜液（具體情況而定）：
1×SSC/0.1%SDS洗膜兩次（冷5min，熱65℃，15min）?檢測信號強度
?0.5×SSC/0.1%SDS 熱冼 65℃, 15min ?依情況可有改動0.2×SSC/0.1%SDS or 0.1×SSC/0.1%SDS。
3.包膜：膜從洗膜液中撈出，在濾紙上晾干，膜表面無可見水膜為止（注意：不能太干，以防探針難以洗脫影響再次使用），用保鮮膜包膜，壓X-光片，置于-20或-70℃ 3—7 天（依據信號強弱掌握曝光時間）
4.沖洗X-光片
在暗室紅燈下取出X-光片，置入顯影液中至雜交帶顯現出來（顯影時間依據信號強弱及曝光時間長短可由幾秒鐘到2分鐘），轉入清水中漂洗，然后放入定影液中定影至清亮（約10分鐘）。自來水沖洗干凈后，晾干，讀片。
5.膜上探針洗脫
再次使用膜前，必須洗去上次探針！
附注：
1. 雜交效率的影響因素
a)雜交溫度：雙鏈DNA分子，T=Tm-20—25℃可達最大雜交率，DNA-RNA雜交分子則低于Tm 值10-15℃。
b)離子強度(1.5M/L NaCl雜交率最高)
c) 雙鏈長度(形成雜交物長度) ：雜交率與雙鏈長度成正比
d)探針的復雜程度 (重復性探針可以增加雜交率)
e)pH5.0-9.0基本無影響。
2. 影響雜交穩定性（影響解鏈溫度的）因素
a) 離子強度 在0.01-0.4M NaCl之間, 每-10×單價陽離子，Tm-16.6℃
b) 堿基組成 AT<CG（在NaCl溶液中）；
c) 去穩定劑（destabilizer） DNA-DNA雜交分子，每1%formamide,Tmˉ0.6℃；6M urea可降低Tm30℃
d)堿基錯配：每 1%的錯配可使Tm降低1℃
e)雙鏈長度（探針雜交物） >500bp基本無影響
3．整個實驗過程中應注意的事項：
1)保證轉膜質量；
2)操作規范；
3)提高雜交靈敏度（信號強度）；
a) 探針量及標記量（探針變性）；
b)比活（性）度 >=108dpm/u(<108弱)；
c)靶 DNA量（絕對量，酶切轉膜決定；相對量，靶DNA相對于探針過量時，完全配對雜交，探針過剩時，完全配對和非嚴格的完全配對均有發生）；
d) 有惰性聚合物增加靈敏度；10%(w/v)500,000(mw)dextran sulfate或8%(w/v)PEG6000。對于單鏈探針，可以增加10-fold雜交信號，dsDNA成100-fold地增加雜交信號 4) 提高特異性：
a)高鹽溶液促進探針與靶序列的堿基配對20×SSC 3M NaCl/0.3M Na3Ci
b) 雜交后洗膜溫度T?Tm
c)雜交后洗膜液濃度組成，高嚴謹度洗膜液使不完全配對的雜交失去穩定，致使探針脫落
d) 雜交時間 8hrs 以后，DNA探針逐漸退火，少量自由與靶DNA雜交.
e)探針長度（>1000bp）過長，高嚴謹度下難洗脫非完全配對雜交探針。
4．放射性同位素：
1) 放射性同位素發出的射線主要有：
a粒子：外照射，一般能量的α粒子穿透能力較弱，射程短，危害性小，稍加防護即可（如手套）；內照射，電離密度大，危害大。
b粒子：穿透能力比α粒子強，外照射危害比α粒子大，可引起皮膚的放射損傷。
g 射線：穿透能力很強，外照射時危害性很大，應采取切實有效的防護措施。
2) 放射性活度及單位：
放射性活度A是指一定量的放射性核素在時間間隔dt內發生自發核衰變數dN與此時間間隔的比值。即A=dN/dt
放射性活度的單位是Becquerel(貝克勒而)，簡稱Bq。
1Bq=1個衰變/秒；1居里=3.7×1010Bq
其不表示放射出射線的多少（如60Co 一個原子衰變防出1個b粒子和一個g光子，而一個32P原子只衰變出一個b粒子），也不表示射線能量的大小。
3) 輻射防護的目的:
防止發生對健康有害的確定性效應(接受放射性治療的患者除外), 并將隨機性損害效應的發生降低到被認為可以接受的水平，從而保障放射工作人員、公眾及其后代的健康與安全，提高放射防護措施的效益，促進放射工作的發展。
4)放射防護的原則：
a)輻射實踐的正當化：生產必須，醫療必須，科研教學必須
b)輻射防護的最優化：即綜合考慮社會、經濟等諸因素之后，使個人劑量的大小、受照人數的多少和不確定發生的照射事件的發生概率可合理達到的低水平。
c)個人劑量限制：為了保證每個人不致受到不合理的危害，必須制定一個個人劑量限制值，放射工作人員的劑量限制：全身均勻照射的年當量劑量限值H全身=50mSV; 不均勻照射時，有效劑量E不應超過H全身。
5)外照射的防護措施：
a)距離防護：人體受到照射的劑量率隨著離開電離輻射源的距離的增大而減少。劑量率與距離的平方成反比。
b)時間防護：在劑量率不變時，劑量與時間成正比，即操作時間越短，人員所受到的照射劑量越小。（
要求放射性作業應操作熟練、操作步驟應盡量簡單易行，盡量減少在輻射場所逗留的時間。）
c)屏蔽防護：利用射線通過物質時，與物質相互作用使其能量被物質吸收而逐漸減弱的原理，可以設置一定的屏障物來進行防護。常用的材料有水、磚、大理石、混凝土、重金屬鉛等。
d)利用衰變：可利用放射性物質存在自發衰變，其活性隨之減少的原理進行外照射防護。如：半衰期小于15天的放射性廢物，允許放置10個半衰期后作一般廢物處理。
6)內照射的防護措施
防止放射性物質經呼吸道吸入
防止放射性物質食入
防止放射性物質經體表進入