T4 RNA Ligase主要用于RNA和RNA之間的連接，連接時需要5'磷酸基團和3'羥基的存在。不僅可以進行RNA分子間的連接，也可以進行RNA分子(最短8個堿基)的環化連接。
T4 RNA Ligase可以用于RNA和單核苷酸之間的連接，單核苷酸必須為5'和3'均磷酸化的形式，此時常用于RNA的3'末端標記。
T4 RNA Ligase也可以用于DNA和RNA之間的連接。當DNA提供5'磷酸基團，RNA提供3'羥基時，連接效率較高；當DNA提供3'羥基，RNA提供5'磷酸基團時，連接效率非常低。
T4 RNA Ligase也可以用于DNA和DNA之間的連接，但連接效率非常低。主要用于DNA的環化連接，例如5' RACE中的cDNA環化。DNA和DNA之間的連接盡管可以進行，但比較困難。
用途：用RNA 3'末端標記；RNA和RNA分子間連接；寡核苷酸的環化；tRNA修飾；5' RACE中寡核苷酸連接到cDNA單鏈；在蛋白質特定位點引入非天然氨基酸。
來源：由大腸桿菌表達，表達基因的來源為T4噬菌體。
活性定義：37℃30分鐘內，催化1 nmol 5'-[P]-(A)12-18成為磷酸酶不能消化的環形產物所需的酶量定義為1個活性單位。
活性檢測條件：50mM Tris-HCl(pH7.5)，10mM MgCl2，10mM DTT，1mM ATP，10μM 5'-[P]-(A)12-18(10μM in 5'-termini)。
純度：不含DNA內切酶和外切酶，不含RNA酶，不含磷酸酯酶。
酶儲存溶液：10mM Tris-HCl(pH7.5)，1mM DTT，50mM KCl，0.1mM EDTA，50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X)：500mM HEPES-NaOH(pH8.0 at 25℃)，100mM MgCl2，100mM DTT。