一.原理
利用人血清中TG抗體與其示蹤物125I-TG進行特異結合反應,形成125I-TG-Ab復合物,然后加入免疫分離劑。復合物被沉淀下來,而游離的示蹤物留在上清液中,離心棄上清液,測定沉淀物放射性,即能反映出血清中TG抗體的含量。
二.標本采集與處理:樣本采集后,應盡快分離血清。
三.儀器設備和試劑
1.適用儀器:上海核所日環光電儀器有限公司的SN-695型智能放免r測量儀。
2.試劑:北京北方生物技術研究所
3. 測定步驟:
取3聚苯乙烯試管若干,用記號筆編號,然后用微量加樣器按下表加樣。加樣前所有的試劑要平衡到室溫并混勻(包括待測樣品)。
試劑 管別 | 陰性管 | 陽性管 | 待測管 |
TG抗體陰性血清 | 10 | ||
TG抗體混合陽性血清 | 10 | ||
待測樣品 | 10 | ||
TG抗體緩沖液 | 200 | 200 | 200 |
125I-TG | 100 | 100 | 100 |
混勻,任取三管測總T,取均值,37°C溫育45分鐘。 | |||
TG抗體羊抗人免疫分離劑 | 100 | 100 | 100 |
充分搖勻后,室溫放置5-10分鐘,3500轉/分鐘,吸棄上清液,測各沉淀管的放射性計數(cpm)。 |
四.結果分析
1. 參考值:TG抗體B/T≥30%為陽性。
2.臨床意義:可用于自身免疫疾病的診斷。
五.注意事項
1. 收到試劑盒后,盡快存放在2-8°C冰箱中。
2. 陰性對照管在數據處理時非常重要,要做復管。
3. 分離劑加前一定要搖勻。
4. 加樣時應避免血清樣品間的交叉污染。
5. 加樣前試劑要平衡到室溫并搖勻。
六.質量控制
1. 每批測定都使用北京北方生物技術研究所提供的制品做質量控制。
2.陽性對照B/N≥3.5時藥盒有效。
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