1)什么是TNT偶聯網織紅細胞裂解物系統？
TNT偶聯網織紅細胞裂解物系統為研究人員提供了一種可供選擇的真核體外翻譯系統，一種單管、偶聯轉錄/翻譯系統。將轉錄產物摻入到翻譯混合物中，TNT偶聯網織紅細胞裂解物系統簡化了體外翻譯的過程，縮短了翻譯所需的時間。標準兔網織紅細胞裂解物翻譯系統所用的RNA來源于用SP6、T3、T7RNA聚合酶啟動子在體外合成的轉錄產物，需要3次分開的反應，每1個反應間需要多個步驟。TNT偶聯網織紅細胞裂解物系統消除了多步操操作帶來的得率低的問題。
2)TNT快速偶聯轉錄/翻譯系統和TNT偶聯網織紅細胞裂解物系統有何差別？
TNT偶聯網織紅細胞裂解物系統為研究人員提供了一種單管、偶聯轉錄/翻譯系統。TNT快速偶聯轉錄/翻譯系統將所有轉錄和翻譯有關的組分，組合在TNT快速超級混合液中，簡化了操作步驟，這些組分包括RNA聚合酶、核苷酸、鹽、RNasin核酸酶抑制劑，研究人員只需加入模板和甲硫氨酸（一般是放射同位素標記）。相比而言，TNT快速偶聯轉錄/翻譯系統更方便（加樣步驟少），無殘留試劑。另外，鎂和鉀的濃度可作相應調整，以增加得率和翻譯的保真度。
3)TNT偶聯網織紅細胞裂解物能得到多少量的蛋白質？
蛋白質的得率和模板有關，在50ul的反應體積中正對照質粒產生150-500ng的蛋白質
4)一次反應用多少量的DNA？
標準步驟用1ug的DNA。用0.2-2.0 ug的DNA可得到滿意的結果。DNA的量大于1ug不增加蛋白質的量。
5)標準兔網織紅細胞裂解物系統能代替TNT兔網織紅細胞裂解物系統？
不，兩個系統的設計不同。如將提供的裂解物系統替換，則不能獲得最佳結果。
6)能用別的來源的RNA聚合酶代替系統中的酶嗎？所用的替代酶的量是多少？
每一個TNT兔網織紅細胞裂解物系統中的組分作了不同的設計。各組分作了最優的配方，替換一個組分會降低得率。比如不能在一個給定的系統中用T7 RNA聚合酶替換SP6 RNA聚合酶。每一個系統的反應中，RNA聚合酶的量適當，用別的RNA聚合酶會導致得率低。
7)用TNT偶聯網織紅細胞裂解物系統翻譯的模板序列有何要求？
插入片段必須克隆在一個SP6、T3、T7 RNA聚合酶啟動子的下游，在合適的翻譯讀碼框中還有一個ATG。其它一些序列會影響最終得率，如起始密碼子前后序列效應， 5`和3`非翻譯序列， 5`帽類似物。 ATP位于Kozak翻譯起始共有序列的模板[Kozak M(1990)Nucleic Acids Research 18,2828]， 比不含這一共有序列的模板，翻譯效率高。在編碼區上游含有如EMCVmRNA的內核糖體進入位點，或3`末端含有poly(A)， 可增加翻譯效率。加入m7G(5)ppp(5)G類似物會抑制TNT偶聯網織紅細胞裂解物的翻譯，因為這一游離類似物和翻譯起始因子結合。
8)用一種RNA聚合酶的啟動子所得的表達是否高于其它序列？
在正對照中，模板是超螺旋，含SP6聚合酶啟動子所得的蛋白質的含量2-3倍高于T3或T7 RNA聚合酶啟動子。但這一結果不適用于所有模板。
9)系統提供的正對照是什么？ 所得蛋白的大小是多少？
TNT偶聯網織紅細胞裂解物系統的正對照，是一超螺旋的模板，編碼熒光素酶，受適合的RNA聚合酶驅動。序列還含一段短的poly(A)片段。在SDS-PAGE膠上，正對照產生的熒光素酶的大小是62kDa。
10)TNT偶聯網織紅細胞裂解物系統該使用線性或環型DNA？
環型DNA和3種RNA聚合酶均能有效配套，線性DNA適用于T3、T7系統，用SP6 RNA聚合酶的翻譯效率卻大大降低。如用線性DNA（比如TNT T7快速偶聯轉錄/翻譯系統），應在RNA聚合酶啟動子的上游有20bp的序列，以使啟動子的結合有效。
11)TNT偶聯兔網織紅細胞裂解物能否和犬的微粒體膜一同用于翻譯后修飾？
是的，TNT偶聯兔網織紅細胞裂解物能和犬的微粒體膜一同使用，作翻譯后修飾，但產物的得率降低50-80%。
12)用TNT偶聯兔網織紅細胞裂解物能得到的最大的蛋白質是多少？
研究人員成功報道用TNT偶聯兔網織紅細胞裂解物能得到的最大的蛋白質是176kDa的蛋白質。