圖 3 實驗使用的質譜 tSRM 儀器方法模板界面
2.4 數據處理
實驗使用TraceFinder 3.2 軟件進行數據庫管理、序列采集、數據處理以及報告模板自定義與輸出，其靈活強大的功能可為農殘檢測的流程化提供一站式服務。尤其，作為面向食品 安全常見農殘的檢測方法數據庫，TraceFinder 中 pQuan 數據 庫包含了完備的農殘定量與確證信息，以及保留時間、CAS、 基本用途等其他相關信息（圖2）。利用pQuan 數據庫，實驗無需再使用標樣進行繁瑣的方法優化與開發，而是從數據庫 中調取相關的條件，直接進行樣品測定。如圖 4 展示的步驟， TraceFinder 軟件使得同時進行數百種農殘檢測的繁復工作大大清晰地流程化了。
圖 4 TraceFinder 軟件用于農殘檢測的流程化工作步驟
3. 結果與討論 TSQ Endura MS 具有業界領先的 SRM 掃描速度，使用簡 便的 tSRM 功能，質譜只在給定的時間窗口內進行特定離子對 的掃描。一方面，這大大提高了質譜掃描離子駐留時間（dwell time）的利用率；另一方面，也唯有此才使得在短至20 min的快速梯度內同時對數百余種農殘進行高靈敏度檢測成為可能 （圖 5）。通過對色譜條件的系統優化，從圖 6 散點圖與頻次 圖可知，實驗實現了對440 種農殘良好的色譜分離，它們均 勻地分布在 20 min 有效分離時間窗口內，這確保了質譜 tSRM 掃描循環時間可以較為均衡地分配到每個transition 上，改善定量效果。
圖 5 上圖：菜椒基質中 440 種農殘同時檢測的總離子流圖，下圖：440 種農殘的提取離子色譜圖（10 pg/μL）
圖 6（1）農殘精確m/z vs. 保留時間散點圖，（2） 保留時間的頻次分布圖
TraceFinder 具有豐富強大的數據瀏覽、編輯與再處理等功能，能為高通量農殘檢測數據處理提供全方位的功能支持。圖 7 為 TraceFinder 數據結果的一種典型界面，這中間 LC-MS/MS 農殘分析的各種信息得以高度凝練地圖形化展示，統全局于一眼，大大有助于提高實際檢測工作中的信息處理效率。同時，這一界面可模板化編輯，具有出色的可擴展性，能滿足不同實驗室的個性化需求。
圖 7 TraceFinder 農殘檢測數據處理結果的典型界面（Compound View）
實驗嚴格綜合考慮峰面積的變異系數 CV % （LOD 濃度點處三次重復進樣的 CV% 開始穩定重現地小于 30%，LOQ 濃度點處 小于 20%）、色譜峰形與信噪比等三種因素，確定了 TSQ Endura MS 對菜椒基質中 440 種農殘進行同時檢測的 LOD 與 LOQ 值， 結果見表1。根據農藥化學屬性導致的響應水平不同，LOD在0.005 pg/μL（5 ppt）到 20 pg/μL（20 ppb）之間，LOQ分布在0.01 pg/μL（10 ppt）到 50 pg/μL（50 ppb）范圍內，對應的峰面積 CV% 分別為 0.34~29.95% 與 0.43~19.94%。并且，有 430 種農 殘的標準曲線相關系數大于 0.99，顯示 TSQ Endura MS 具有出色的線性。
進一步的統計分析得知，實驗中 440 種農殘 LOD 與 LOQ 的中位數值（median value）分別為0.05 pg/μL（50 ppt）與 0.1 pg/μL（100 ppt），顯示了基于主動離子管控技術研發的 TSQ Endura MS 具有出色的靈敏度性能。同時，值得注意的是，本實驗為確保分析的高通量性與大多數農殘的檢測效果，使用了單一流動相體系進行快速正負電離切換，一定程度上犧牲了適用于負離子模式的農殘的檢測靈敏度（使用乙酸銨體系， 會有很大改善）。但盡管如此，如圖 8 所示，對表 1 中的農殘 LOD 與 LOQ 值進行頻次分析可知，累計分別有438（占總數 的 99.5%）與 430 種（占總數的 97.7%）農殘的 LOD 與 LOQ 小于 10 pg/μL 這一國標最低 MRL 限值，同時這也是歐盟法規 與日本肯定列表制度中的通用標準。本方法實現的 LOQ 全部 滿足GB2763-2014強制國家標準中的MRLs指標要求。因此， TSQ Endura LC-MS/MS 是食品安全領域中高靈敏度、高特異性與高通量農殘檢測的優質平臺。
圖 8 本實驗中440 種農殘同時檢測的LOD與LOQ值頻次統計結果