一、儀器設備:
721型分光光度計;溫箱;研缽;漏斗;
移液管:0.5 ml 1支、5 ml 3支、2 ml 1支;容量瓶(10 ml )8個;
二、試劑:
1.乙酸乙酯(分析純);
2.連二亞硫酸鈉(Na2S2O4),分析純,粉末;
3.1%TTC溶液:準確稱取TTC1.0000克,溶于少量水中,定容到100 ml 。用時稀釋至需要濃度。
4.0.1 M pH7.5磷酸緩沖液。
5.2N硫酸:用量筒取比重1.84的濃硫酸55 ml ,邊攪拌邊加入盛有500 ml 蒸餾水的燒杯中,冷卻后稀釋至1000 ml 。
三、材料:
水培或砂培的玉米或小麥根植物材料(需洗凈)。
四、方法步驟:
TTC標準曲線制作:
取0.2 ml 0.5%的TTC溶液加入到10 ml 具塞刻度試管中,再加入少許Na2S2O4粉末,搖勻后即產生紅色的甲臜。再用乙酸乙酯定容至刻度,搖勻。然后分別取此液0.25、0.50、1.00、1.50、2.00 ml 至10 ml 具塞刻度試管中,以乙酸乙酯定容至刻度,即得到含甲臜 0.025、0.05、0.10、0.15、0.20毫克的標準比色系列。以空白作參比,在485n M 波長下測定光密度,繪制標準曲線。
定性測定方法:
取樣品0.25g放入三角瓶,加入0.5%TTC溶液和0.1 M 磷酸緩沖液(pH7.5)各5 ml 充分混勻,并將根尖完全浸入在溶液中,至37℃保溫箱內1小時,保溫時間一到立即加入2N H2SO4溶液2 ml 以終止反應。如根尖顯紅色表明該處具有活躍的脫氫酶存在。
定量測定方法:
取出定性顯色的根段,用濾紙吸干外附水分,至研缽中,加乙酸乙酯3-4 ml 研磨。將提取的紅色TTF小心倒入刻度試管中,殘渣用乙酸乙酯沖洗2-3次,直至洗液不帶紅色為止,全部洗液合并于試管中,最后用乙酸乙酯定容至10 ml ;搖勻后,以乙酸乙酯為對照于485n M 下比色,記錄光密度值。查標準曲線,即可求出TTC還原量。  展開 |