實驗方法原理
氯化三苯基四氮唑（TTC）是標準氧化還原電位為80毫伏的氧化還原物質。溶于水中為無色溶液，但還原后通過下列反應，生成紅色而不溶于水的三苯基甲臢。反應式如下：  生成的甲臜呈穩定的紅色，不會被空氣中的氧自動氧化。所以TTC被廣泛地用作酶試驗的受氫體。植物根引起的TTC還原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、蘋果酸得到加強；而被丙二酸、碘乙酸所嚴重抑制。所以，它能夠測定脫氫酶的活性。由該酶活性表示根系活力。 | |
| 實驗材料 | |
| 試劑、試劑盒 | |
| 儀器、耗材 | |
| 實驗步驟 | 一、儀器設備： 721型分光光度計；溫箱；研缽；漏斗； 移液管：0.5 ml 1支、5 ml 3支、2 ml 1支；容量瓶（10 ml ）8個； 二、試劑： 1．乙酸乙酯（分析純）； 2．連二亞硫酸鈉（Na2S2O4），分析純，粉末； 3．1%TTC溶液：準確稱取TTC1.0000克，溶于少量水中，定容到100 ml 。用時稀釋至需要濃度。 4．0.1 M pH7.5磷酸緩沖液。 5．2N硫酸：用量筒取比重1.84的濃硫酸55 ml ，邊攪拌邊加入盛有500 ml 蒸餾水的燒杯中，冷卻后稀釋至1000 ml 。 三、材料： 水培或砂培的玉米或小麥根植物材料（需洗凈）。 四、方法步驟： TTC標準曲線制作： 取0.2 ml 0.5%的TTC溶液加入到10 ml 具塞刻度試管中，再加入少許Na2S2O4粉末，搖勻后即產生紅色的甲臜。再用乙酸乙酯定容至刻度，搖勻。然后分別取此液0.25、0.50、1.00、1.50、2.00 ml 至10 ml 具塞刻度試管中，以乙酸乙酯定容至刻度，即得到含甲臜 0.025、0.05、0.10、0.15、0.20毫克的標準比色系列。以空白作參比，在485n M 波長下測定光密度，繪制標準曲線。 定性測定方法： 取樣品0.25g放入三角瓶，加入0.5%TTC溶液和0.1 M 磷酸緩沖液（pH7.5）各5 ml 充分混勻，并將根尖完全浸入在溶液中，至37℃保溫箱內1小時，保溫時間一到立即加入2N H2SO4溶液2 ml 以終止反應。如根尖顯紅色表明該處具有活躍的脫氫酶存在。 定量測定方法： 取出定性顯色的根段，用濾紙吸干外附水分，至研缽中，加乙酸乙酯3－4 ml 研磨。將提取的紅色TTF小心倒入刻度試管中，殘渣用乙酸乙酯沖洗2－3次，直至洗液不帶紅色為止，全部洗液合并于試管中，最后用乙酸乙酯定容至10 ml ；搖勻后，以乙酸乙酯為對照于485n M 下比色，記錄光密度值。查標準曲線，即可求出TTC還原量。 |
