1、TaqMan探針位置盡可能靠近擴增引物，但不能與引物重疊。
2、長度一般為18～40堿基。
3、G+C含量控制在40%～80%左右。
4、避免連續相同堿基的出現，特別是要避免GGGG或更多G出現。
5、在引物的5'端避免使用G。
6、選用比較多的堿基C。
7、退火溫度Tm控制在68～700C左右。
