VE中苯并芘的HPLC檢測

苯并芘是由5個苯環構成的多環芳烴化合物，是一種強致癌物，在生產植物油的過程中可能因環境污染、原材料攜帶或加工時溫度過高而產生。目前，維生素E的生產都是以植物油生產脫臭過程的副產物-脫臭餾分作為原料，因此苯并芘也不可避免地殘留于脂溶性的維生素E產品中。為了評價維生素E中苯并芘含量是否超標，本方法建立了一種快捷、準確的定量檢測方法。

實驗部分

儀器與試劑

島津液相色譜儀（配熒光檢測器），超聲波清洗器，氮吹儀，Cleanert Bap-3固相萃取柱，Cleanert Silica固相萃取柱（天津博納艾杰爾科技），Venusil ASB C18液相色譜柱（天津博納艾杰爾科技），0.45μm PTFE針式過濾器（天津博納艾杰爾科技）。

苯并芘標準品，正己烷（色譜純），二氯甲烷（色譜純），乙腈（色譜純）。

樣品制備

稱取天然維生素E成品（或原料）0.5g于12ml樣品瓶中，加入3ml正己烷渦旋震蕩溶解，作為待凈化液。

凈化處理

在Cleanert Bap-3（500mg/6ml）小柱上面串聯Cleanert Silica（500mg/6ml）小柱，先用5ml二氯甲烷活化串聯好的小柱，再用5ml正己烷活化；將待凈化液全部上樣到小柱，再用2ml正己烷潤洗樣品瓶，然后上樣到小柱；用10ml正己烷淋洗小柱后卸下Cleanert Silica小柱，再用5ml正己烷淋洗Cleanert Bap-3小柱一次，棄去全部流出液，最后用6ml二氯甲烷洗脫小柱并將流出液收集至12m樣品瓶中，在40℃的條件下氮氣吹干，用乙腈溶解定容至1ml，過濾待測。

液相條件

色譜柱：Venusil ASB C18；5μm，150?；4.6×250mm；流動相，乙腈:水=80:20；流速，1.0ml/min；進樣量，20μl；熒光檢測器：發射波長406，激發波長384。

結果與討論

固相萃取柱的選擇

Cleanert Bap-3為聚苯乙烯二乙烯苯高聚物材料，利用高聚物苯環和苯并芘的π-π作用，其可以對苯并芘有很好的吸附保留。在植物油中苯并芘的檢測應用中，用Cleanert Bap-3做小柱填充物可替代中性氧化鋁做小柱填充物的方法。在Cleanert Bap-3（500mg/6ml）小柱上面串聯Cleanert Silica小柱，可去除樣品中維生素E等成份，而且不影響苯并芘的回收率。

線性關系和定量限

稱取苯并芘標準品適量，用正己烷配制成濃度為100μg/ml的標準溶液。將標準溶液用乙腈稀釋到濃度分別為：0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，20.0 ng/ml，按照上述條件分別注入液相色譜儀檢測，以苯并芘的峰面積對其濃度作標準曲線，線性方程為y=37658x-47093，相關系數r=0.9996。10倍信噪比計算其最低定量濃度為0.5μg/g。

準確度與精密度

在天然維生素E樣品中添加一定量的苯并芘標準溶液，所得回收率數據詳見表1。

實際樣品的檢測

采用上述檢測方法，對天然維生素E原料進行檢測，并將檢測結果與氣質檢測結果對比，兩種方法的檢測結果一致。

小結

Cleanert BAP-3 和Cleanert Silica固相萃取小柱，應用于天然維生素E及其生產原料的苯并芘檢測，去除雜質的效果良好，前處理的操作過程簡單、快速、準確。