與DNA的Southern blot印跡相對應，蛋白質分析中應用的Western blot印跡技術也是通過對目標組分電泳分離，并轉移至固相支持物（硝酸纖維膜），利用特異抗體作為探針，對靶物質進行檢測。
蛋白質的Western blot結合了凝膠電泳的高分辨率和固相免疫檢測的特異敏感等多種優點，可檢測到低至1-5ng中等大小的靶蛋白。
【試劑】
轉移緩沖液: 25mM Tris- Cl, 192mM甘氨酸，20%甲醇(v/v), 0.01%SDS, pH8.3
漂洗液: PBS-Tween 20
150mM NaCl, 10mM Tris-Cl(pH7.4), 0.05% Teeen-20(v/v)
封閉液: 5%脫脂奶粉或3％BSA溶于10mM PBS-Tween 20
一抗: 特異的單克隆或多克隆抗體
酶標二抗
底物液：5mg DAB/ml 溶于0.05M檸檬酸－磷酸鹽緩沖液(pH5.0)
【操作方法】
1．剪6張與電泳凝膠大小一致的Watman 3MM濾紙和1張硝酸纖維膜(NC)，帶手套操作。
2．將上述濾紙及NC膜，浸入雙蒸水中，再浸泡轉移液中。
3．凝膠用雙蒸水漂洗2次，再用轉移液漂洗10分鐘，2次。
4．按圖示裝好凝膠與NC膜，注意NC膜的藥膜面朝向凝膠，膜與凝膠之間無氣泡。
5．將裝好的膠板插入轉移槽中，注意NC膜位于陽極側。
6．槽中加轉移液，使之漫過鉑金絲，接好冷卻水系統。
7．電泳：6-10v/cm (電極距離)，1-16小時(依據轉移效果)。
8．電泳完畢后，取出NC膜，用鉛筆做好標記，漂洗液洗3次，每次5分鐘。
9．封閉： 將NC浸入封閉液中1小時或4℃過夜。用漂洗液洗3次，每次5分鐘。
10．將NC膜切成小條，放入反應槽中，加入稀釋好的一抗，同時做陰陽對照。室溫反應2小時，或4℃過夜。振蕩漂洗3次，每次10分鐘。
11. 加酶標二抗，室溫反應1-2小時，振蕩漂洗3次，每次10分鐘。
12. 顯色：加入底物液，至蛋白帶清晰為止。
13. 終止反應： 水漂洗。
【轉移事項】
1． 電泳畢可用含0.2%麗春紅S的3％冰醋酸水溶液染NC膜，來觀察轉移結果和標準蛋白位置。 或用考馬斯亮藍染凝膠來觀察轉移效果。
2． 酶標二抗可以是IgG, IgM, IgA. 也可用酶標的SPA蛋白。
3．轉移好的NC膜，如不接著做酶標反應，可在封閉后，漂洗，晾干，封于塑料袋中，4℃保存備用。