(二)使用液
單去污劑裂解液(50mmol/L Tris?HCl pH8.0,150mmol/L NaCl,1%SDS,1mmol/L PMSF):
1mol/L Tris?HCl(pH8.0)2.5ml
NaCl 0.438g
10%SDS 0.5ml
200mmol/L PMSF 2.5ml
蒸餾水至 50ml
若檢測磷酸化蛋白,需加入100ul 5mol/L NaF和500ul 100mmol/L激活礬酸鈉,混勻后, 4℃保存。
G250考馬斯亮藍溶液(染膠專用)
考馬斯亮藍G250: 0.063g
甲醇: 15ml
乙酸: 5ml
蒸餾水至 50ml
溶解后,4℃保存。
分離膠(兩塊膠,10ml)
8% 10% 12% 15%
超純水 4.6ml 4.0ml 3.3ml 2.3ml
30%Acr/Bic(29:1) 2.7ml 3.3ml 4.0ml 5.0ml
1.5 mol/L Tris?HCl(pH8.8) 2.5ml 2.5ml 2.5ml 2.5ml
10%SDS 100ml 100ml 100ml 100ml
10%AP(過硫酸胺) 100ml 100ml 100ml 100ml
TEMED 4ml 4ml 4ml 4ml
加 TEMED后,立即混勻即可灌膠。
4%濃縮膠(兩塊膠,5ml)
超純水 2.1ml
30%Acr/Bic(29:1) 0.5ml
0.5 mol/L Tris?HCl(pH6.8) 0.38ml
10%SDS 30ml
10%AP(過硫酸胺) 30ml
TEMED 3ml
加 TEMED后,立即混勻即可灌膠。
還原型5XSDS上樣緩沖液(0.25mol/L Tris/HCl pH6.8,0.5mol/L二硫叔糖醇,10% SDS,0.5%溴酚藍,50%甘油)
0.5 mol/L Tris?HCl(pH6.8) 0.5ml
二硫叔糖醇(DTT,MW154.5) 0.078g
SDS 0.1g
10%溴酚藍 0.05ml
甘油 0.5ml
混勻后,分裝于1.5ml離心管中,4℃保存。
電泳液緩沖液(25mmol/L Tris,0.25mol/L甘氨酸,0.1% SDS)
Tris(MW121.14) 1.515g
甘氨酸(MW75.07) 9.385g
SDS 0.5g
蒸餾水至 500ml
溶解后室溫保存,次溶液可重復使用2~3 次。
轉移緩沖液(48mmol/L Tris,39mmol/L甘氨酸,0.01% SDS,20%甲醇)
甘氨酸(MW75.07) 2.9g
Tris(MW121.14) 5.8g
SDS 0.1g
甲醇 200ml
蒸餾水至 1000ml
溶解后室溫保存,次溶液可重復使用2~3次。
10X麗春紅染液
麗春紅S 0.2g
三氯乙酸 3g
磺基水楊酸 3g
蒸餾水至 10ml
溶解后,避光4℃保存,使用時將其稀釋10倍,稀釋液勿回收。
TBS緩沖液(10mmol/L Tris/HCl pH7.5, 150mmol/L NaCl)
1 mol/ LTris?HCl(pH7.5) 10ml
NaCl 8.8g
蒸餾水至 1000ml
TBST緩沖液(含 0.05%Tween20的TBS緩沖液)
20%Tween20 1ml
TBS 400ml
混勻后即可使用,最好現用現配。
封閉液(含5%脫脂奶粉的TBST緩沖液)
脫脂奶粉(國產,安怡牌) 2.5g
TBST 50ml
溶解后4℃保存。使用時,恢復室溫,用量以蓋過膜面即可,一次性使用。
洗脫抗體緩沖液(100mmol/L 2-Mercaptoethanol,2%SDS,62.5m mol/L Tris?HCl pH6.8)
14.4 mol/L 2- Mercaptoethanol(β-巰基乙醇) 700 ml (通風廚里加)
SDS 2g
0.5mol/L Tris?HCl(pH6.8) 12.5ml
超純水至 100ml
配制時,在通風廚內進行。 4℃保存。可重復使用1次。
ECL化學發光試劑
promage產品,分A和B兩種試劑,使用時等體積混合,每張膜使用混合液體積1ml。