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  • 發布時間:2020-09-01 12:22 原文鏈接: Western印跡法(試劑配制和操作步驟)3

    10X麗春紅染液
    麗春紅S 2g
    三氯乙酸 30g
    磺基水楊酸 30g
    蒸餾水至 100ml
    使用時將其稀釋10倍。

    TBS緩沖液(100mmol/ L Tris?HCl pH7.5,150mmol/L NaCl)

    1 mol/ LTris?HCl(pH7.5) 10ml
    NaCl 8.8g
    蒸餾水至 1000ml TBST緩沖液(含 0.05%Tween20的TBS緩沖液)
    20%Tween20 1.65ml
    TBS 700ml
    混勻后即可使用,最好現用現配。

    封閉液(含5%脫脂奶粉的TBST緩沖液)
    脫脂奶粉(國產,安怡牌) 5g
    TBST 100ml
    溶解后4℃保存。使用時,恢復室溫,用量以蓋過膜面即可,一次性使用。

    洗脫抗體緩沖液(100mmol/L 2-Mercaptoethanol,2%SDS,62.5m mol/L Tris?HCl pH6.8)

    14.4 mol/L 2- Mercaptoethanol(β-巰基乙醇) 700 ml (通風廚里加)
    SDS 2g
    0.5mol/L Tris?HCl(pH6.8) 12.5ml
    超純水至 100ml
    配制時,在通風廚內進行。 4℃保存。可重復使用1次。

    顯影液(5X)

    自來水(加熱至50℃) 375ml (以下藥品加到溫水中)
    米吐爾 1.55g
    亞硫酸鈉(無水) 22.5g
    碳酸鈉(無水) 33.75g
    溴化鉀 20.95g
    補水至 500ml
    配制時,上述藥品應逐一加入,待一種試劑溶解后,再加入后一種試劑。4℃保存。使用時用自來水稀釋至1倍。
    定影液
    自來水(50~60℃) 700ml (以下藥品按順序加入前者溶解后再加后者)
    硫代硫酸鈉 240g
    亞硫酸鈉(無水) 15g
    冰乙酸 12.6ml
    硼酸 7.5g
    鉀明礬 15g(水溫冷至30℃以下時再加入)
    加水定容至1000ml,室溫保存

    抗體
    用TBST稀釋至一定濃度使用,每張膜需0.5ml
    化學發光試劑
    購自北京中山公司,為Santa Cruz產品,分A和B兩種試劑。

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